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cib百里酚蓝

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么不同PCR仪扩增结果不同

在下最近做PCR,扩增某植物基因组的DNA,在国产仪器上扩出条带单一,产物量较少,同样的条件在进口仪器上却扩出很多非特异性条带,阴性对照也有条带,请高手指点一下该如何调一下条件
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这应该不是机器的问题,而是你操作的问题,出现了假阳性。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-24 17:01:07
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 是有可能 2011-08-24 20:09:42
cib百里酚蓝(金币+5): 2011-08-24 21:57:23
引用回帖:
1楼: Originally posted by cib百里酚蓝 at 2011-08-24 16:50:14:
在下最近做PCR,扩增某植物基因组的DNA,在国产仪器上扩出条带单一,产物量较少,同样的条件在进口仪器上却扩出很多非特异性条带,阴性对照也有条带,请高手指点一下该如何调一下条件

机器不同升降温速率不同,或许需要一定的摸索,甚至机器不同,显示的温度和实际都有可能不一致,仅供参考!
3楼2011-08-24 17:10:54
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-24 19:31:30
呵呵,遇到过类似的问题,同样是Techene的机子,3000的25孔和412的96孔,同样的样品扩出来也不一样!建议在扩增出条带的机子上优化条件!
jiayoubashaonian
4楼2011-08-24 19:01:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


西瓜(金币+1): good 2011-08-25 17:25:43
其实你只需要用一个PCR仪完成你的扩增就OK了,
可以优化一下你的PCR体系
设置温度梯度进行扩增
选择合适的延伸时间
就基本OK了。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-08-25 09:17:59
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heroyl

木虫 (正式写手)

有这种情况的,我们一般做自己的东西一直用同一个仪器的,你的在两个上都能做出来那你就根据你的结果再考虑用哪个,再优化条件!
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
6楼2011-08-25 10:48:34
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xbl3688

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good 2011-08-25 17:26:12
1、不同的机子、甚至同一台机子同样的程序还有可能出现不一样的结果;
2、扩出的条带比较浅可以做一个降落pcr,再用自己之前延伸的温度扩25个循环,这样结果应该会好点。也可以做梯度pcr摸索最佳延伸温度;
3、LZ第二次扩基因的时候阴性对照都有条带了,有可能操作过程体系污染了。模板量加多了也会出现杂带,或是条带不清晰的情况
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
7楼2011-08-25 15:26:12
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jb1003

新虫 (初入文坛)

产物量少,可以用所得的PCR产物,为模板再进行一次PCR这样可以增加产物量。有非特异性条带,我认为不是机子问题,而是PCR本身就存在,我为了P一段ITS序列,已经做了半年了,50个样品还做没完,因为P的重复性太差了。基本上把该注意,该优化的,都整了。依然做不出好结果。悲催啊!
8楼2011-08-26 17:19:18
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