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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么PCR扩增带弱（引物50个碱基）
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zhangjie801284

木虫 (正式写手)

c

[交流] 为什么PCR扩增带弱（引物50个碱基） 已有12人参与

用五十个碱基的引物扩增PCR时为何条带差别那么大（左边四条是同一对引物，右边两条是另一对引物），尤其是左边的四条带？请看图

左右臂PCR.jpg

[ Last edited by zhangjie801284 on 2012-12-4 at 18:51 ]
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c
1楼 2012-12-04 18:50:01
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quenyhuang

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增带左右臂的产物，想要产物较浓，引物的量一定要多加些，加量可参考平常引物的2倍的量，效果肯定好起来。。。
当然其他的PCR条件调整的话，退货温度可提高至59℃。。
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2楼2012-12-05 11:56:59
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自然_法则

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
特异性很好 应该是P出来了 试试降低退火温度 或者做个回收就可以了
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每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
3楼2012-12-05 12:37:01
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
多3~5个循环试试。另外最后72°C延伸再多加几分钟。我不知道你是最后延伸多久，不过可以10分钟。

[ Last edited by dajiong on 2012-12-5 at 13:02 ]
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哦也
4楼2012-12-05 13:00:44
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FiFily

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么我觉得是你的引物加的太多了呢？二聚体那么严重
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5楼2012-12-05 13:35:18
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cqr68

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把退火的温度降低一点，循环数增大到40个循环
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6楼2012-12-06 14:28:38
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gdj363702043

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肯定不是引物的问题 也不是模板的问题  
所以  必定是你的循环次数和退火温度的问题可做一个梯度  增加循环次数
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加油努力
7楼2012-12-06 17:53:03
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xutiancai

铁杆木虫 (职业作家)
特异性很好 应该是P出来了 试试降低退火温度 或者做个回收就可以了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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加油~！
8楼2012-12-06 18:40:53
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
下面怎么这么亮？
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
9楼2012-12-06 20:00:28
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by FiFily at 2012-12-05 13:35:18
为什么我觉得是你的引物加的太多了呢？二聚体那么严重

下面怎么这么亮
回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
10楼2012-12-06 20:01:07
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