| 查看: 1660 | 回复: 15 | ||
wangning__木虫 (正式写手)
|
[求助]
为什么PCR扩增出来使这个样子，各位高手帮忙支招吧！
|
|
古菌槽式扩增，以全长的50，100，150，200稀释为模版，得到下面的图，为什么有杂带，后来提高退火温度2℃，4℃，延伸时间缩短15s，20s，还是这个样子，换了新的体系试剂还是没有消除，这是什么原因呢？ PS：引物为109/1510;109/515，扩增产物用于DGGE 求求各位大侠给支个招吧，小妹实在是找不出原因了。  2000的marker,分别为全长扩增产物稀释50倍，100，150，200倍，其它条件一致 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点
已经有12人回复- 用PCR扩增后的DNA如何测序？不能直接用PCR就知道是什么菌种之类的吧？
已经有6人回复
- OVER-LAP PCR第二轮扩增不出来条带
已经有6人回复
- PCR引物的量如何确定，求助高手指教
已经有11人回复
- PCR测序结果出来后怎样在NCBI上进行比对？求各位高手帮忙！
已经有12人回复
- 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图，怎么改善！！！
已经有6人回复
- 为什么不同PCR仪扩增结果不同
已经有7人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因
已经有12人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
2楼2012-08-04 14:33:48
3楼2012-08-04 21:18:12
eagles123
金虫 (正式写手)
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 5854.4
- 散金: 1607
- 红花: 12
- 帖子: 667
- 在线: 700.7小时
- 虫号: 322286
- 注册: 2007-03-11
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2012-08-04 22:00:14
snzydong
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 5475.2
- 散金: 7
- 红花: 10
- 帖子: 1662
- 在线: 391.9小时
- 虫号: 242864
- 注册: 2006-04-12
- 专业: 植物遗传学
wangning__5楼2012-08-05 09:08:48
6楼2012-08-05 09:24:01
wangning__
木虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 2380.9
- 散金: 118
- 红花: 10
- 帖子: 330
- 在线: 101.2小时
- 虫号: 1239990
- 注册: 2011-03-21
- 性别: MM
- 专业: 环境污染化学
7楼2012-08-05 09:26:59
dajiong
金虫 (正式写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 1150.2
- 散金: 47
- 红花: 1
- 帖子: 329
- 在线: 266.9小时
- 虫号: 1615753
- 注册: 2012-02-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2012-08-05 21:18:51
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2012-08-06 16:31:40
sd3824289
木虫 (正式写手)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2304.1
- 散金: 33
- 帖子: 740
- 在线: 105.5小时
- 虫号: 1657712
- 注册: 2012-03-02
- 专业: 生物化学
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-07 15:37:57
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-07 15:37:57
| 建议楼主做个温度梯度试试，我筛选条件的时候都是用这个方法，很好的！基本上做一次就知道最适退火温度了，一般情况下，如果两次PCR用到得酶不一样，也会导致在相同的退火温度下得到不一样的结果！模板浓度如果高，建议加0.5μl就够了，如果浓度不高，就得加1μL，引物浓度应该都是10MM！祝楼主好运！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
10楼2012-08-07 09:26:53