【答案】应助回帖

1楼2012-04-22 14:22:16

cheng_xiao

木虫 (小有名气)

MolEPI: 2
应助: 59 (初中生)
金币: 3645.2
帖子: 273
在线: 62.7小时
虫号: 1553648
注册: 2011-12-27
性别: GG
专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-04-22 19:17:22

呵呵，如果你只是鉴定菌种的话，可以把PCR产物直接送去测序公司测序，像华大、英骏等，如果你是对基因后续还操作，那你可以把基因克隆到载体上，转入菌种，把菌种送去测序。测序得到的结果到NCBI中比对，看你的菌与谁最相近，这样就可以大体判定了，实验顺利啊

我努力我奋斗我成功

2楼2012-04-22 16:12:37

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

MolEPI: 58
应助: 388 (硕士)
贵宾: 0.238
金币: 17138.7
红花: 43
帖子: 2251
在线: 712.4小时
虫号: 111074
注册: 2005-11-20
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+4, 应助指数+1, 专家考核, 专家就是专家！ 2012-04-22 19:17:44

用PCR扩增后的DNA一是可以直接送测序公司测序，但如果PCR不纯就测不出来，二是先连接到T载体上，转化验证后送菌测序。
虽然发展了不少DNA指纹技术，并且很多都和PCR有关，但通过一个PCR直接判定是什么菌现在还基本做不到。

3楼2012-04-22 16:43:51

chaovt714

金虫 (小有名气)

应助: 12 (小学生)
金币: 1579.3
散金: 5
红花: 1
帖子: 276
在线: 116.9小时
虫号: 354876
注册: 2007-04-24
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-22 20:52:00

我们做菌种鉴定在16S rRNA基因同源性分析这一步中，先用通用引物扩增出16S rDNA，这一过程最好都在无菌条件下操作，之后将PCR产物进行纯化，附带上适量的你所用的引物，送英俊或生工进行测序，再将测得的序列在NCBI中进行Blast，即可知道你的菌种与哪类细菌亲源关系最近了~~~

赞一下(1人)

4楼2012-04-22 20:32:04

danyzj01

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3234.7
散金: 126
红花: 1
帖子: 518
在线: 60小时
虫号: 1725610
注册: 2012-03-29
性别: GG
专业: 药物毒理

引用回帖:

4楼: Originally posted by chaovt714 at 2012-04-22 20:32:04:
我们做菌种鉴定在16S rRNA基因同源性分析这一步中，先用通用引物扩增出16S rDNA，这一过程最好都在无菌条件下操作，之后将PCR产物进行纯化，附带上适量的你所用的引物，送英俊或生工进行测序，再将测得的序列在NC ...

生工他们是用什么来测序的呢？

5楼2012-04-22 22:07:48

adili

铁虫 (初入文坛)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 401.1
散金: 2
红花: 2
帖子: 49
在线: 18.1小时
虫号: 1777843
注册: 2012-04-25
性别: MM
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

生工测序也可以，最好克隆之后测序比较准确一点

耐心，细心，信心缺一不可

6楼2012-04-26 20:03:45

fishhuying

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 7
帖子: 11
在线: 14.8小时
虫号: 1210410
注册: 2011-02-23
性别: MM
专业: 食品科学基础

引用回帖:

4楼: Originally posted by chaovt714 at 2012-04-22 20:32:04
我们做菌种鉴定在16S rRNA基因同源性分析这一步中，先用通用引物扩增出16S rDNA，这一过程最好都在无菌条件下操作，之后将PCR产物进行纯化，附带上适量的你所用的引物，送英俊或生工进行测序，再将测得的序列在NCBI ...

你好，我是刚刚开始做相关实验的。完全不懂啊，请问PCR产物怎么纯化啊？另外，如果提取的DNA是混合DNA而非纯培养物的DNA，那么如何判定PCR将我混合样本中所有目标菌的DNA都扩增成功了呢？

7楼2018-03-13 22:45:06