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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增出来的条带,与预计大小一致,测序居然什么都不是????
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wonwin29

金虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增出来的条带,与预计大小一致,测序居然什么都不是????

模板:基因组DNA    酶：invitrogen   白金Taq
PCR扩增出来的条带,与预计大小一致(580bp),
测序居然什么都不是???? 就是在NCBI库里根本没找到.
显然，不是非特异扩增，感觉根本就不是按照模板扩增的。
是什么原因呢？百思不得其解。
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1楼2013-05-16 17:15:21
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wonwin29(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-16 17:22:40
我怀疑测序的时候样品搞混了, 楼主观察一下测序的结果文件, 如果对应的是580的PCR产物, 那么在580附近以后信号会一下子小到背景的高度.
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2楼2013-05-16 17:21:43
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

使用基因组DNA扩增的话很容易出现单引物扩增的情况，建议设计引物之后BLAST比对引物的特异性
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Undefined！
3楼2013-05-25 00:55:02
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阿树的秋天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以在你测得的序列上查找你的引物序列
如果有是不是引物特异性的问题啊
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4楼2013-05-25 09:18:18
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该能单向测通，测错了的可能比较小。再来。
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我不会！
5楼2013-12-06 00:32:05
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