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20112012

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带很亮,但测序没信号 已有1人参与

朋友的PCR条带跑出来很亮,但拿到测序公司测序时却总是没信号、测不出来,请问是什么原因?测的是ITS序列,测序公司美吉
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还有可能是你的引物不适合测序的,或者是引物特异性不好
5楼2013-02-25 09:31:29
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peakg7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-25 08:39:40
谢谢,那这是基因本身的问题吗?可是看的文献上做这个基因的都是直接拿pcr产物测序的...

不是,别人的能测序,你的不能,很有可能是你p出来的是假阳性的结果,你可以参考别人的引物,适当增长你的引物长度,提高退火温度等,来验证你的结果。
6楼2013-02-25 14:49:14
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20112012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-25 14:49:14
不是,别人的能测序,你的不能,很有可能是你p出来的是假阳性的结果,你可以参考别人的引物,适当增长你的引物长度,提高退火温度等,来验证你的结果。...

引物用的都一样,一起扩的,跑出来的DNA条带大小也对,就是测序时没有信号,什么原因?
7楼2013-02-27 13:22:53
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peakg7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-27 13:22:53
引物用的都一样,一起扩的,跑出来的DNA条带大小也对,就是测序时没有信号,什么原因?...

那就构建到载体里面,再送去测序了。
8楼2013-02-27 15:06:10
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lhs521521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-27 13:22:53
引物用的都一样,一起扩的,跑出来的DNA条带大小也对,就是测序时没有信号,什么原因?...

可能回收浓度太低!也有可能是公司的原因!不好说!
寻找真正的自我!
9楼2013-02-27 15:29:12
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普通回帖

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以构建到载体里面去,再送去测序,这样肯定能测成功
2楼2013-02-24 20:55:32
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20112012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-24 20:55:32
可以构建到载体里面去,再送去测序,这样肯定能测成功

谢谢,那这是基因本身的问题吗?可是看的文献上做这个基因的都是直接拿pcr产物测序的
3楼2013-02-25 08:39:40
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该不是基因的问题,可能是引物有问题。
4楼2013-02-25 09:29:13
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月光碎

新虫 (初入文坛)

可以构建到载体里面去
10楼2013-02-28 14:42:46
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