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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条带很亮，但测序没信号
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20112012

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR条带很亮，但测序没信号 已有1人参与

朋友的PCR条带跑出来很亮，但拿到测序公司测序时却总是没信号、测不出来，请问是什么原因？测的是ITS序列，测序公司美吉
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1楼 2013-02-24 16:11:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有可能是你的引物不适合测序的，或者是引物特异性不好
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5楼2013-02-25 09:31:29
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peakg7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-25 08:39:40
谢谢，那这是基因本身的问题吗？可是看的文献上做这个基因的都是直接拿pcr产物测序的...

不是，别人的能测序，你的不能，很有可能是你p出来的是假阳性的结果，你可以参考别人的引物，适当增长你的引物长度，提高退火温度等，来验证你的结果。
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6楼2013-02-25 14:49:14
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20112012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-25 14:49:14
不是，别人的能测序，你的不能，很有可能是你p出来的是假阳性的结果，你可以参考别人的引物，适当增长你的引物长度，提高退火温度等，来验证你的结果。...

引物用的都一样，一起扩的，跑出来的DNA条带大小也对，就是测序时没有信号，什么原因？
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7楼2013-02-27 13:22:53
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peakg7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-27 13:22:53
引物用的都一样，一起扩的，跑出来的DNA条带大小也对，就是测序时没有信号，什么原因？...

那就构建到载体里面，再送去测序了。
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8楼2013-02-27 15:06:10
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lhs521521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 20112012 at 2013-02-27 13:22:53
引物用的都一样，一起扩的，跑出来的DNA条带大小也对，就是测序时没有信号，什么原因？...

可能回收浓度太低！也有可能是公司的原因！不好说！
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寻找真正的自我！
9楼2013-02-27 15:29:12
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普通回帖

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以构建到载体里面去，再送去测序，这样肯定能测成功
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2楼2013-02-24 20:55:32
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20112012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-24 20:55:32
可以构建到载体里面去，再送去测序，这样肯定能测成功

谢谢，那这是基因本身的问题吗？可是看的文献上做这个基因的都是直接拿pcr产物测序的
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3楼2013-02-25 08:39:40
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该不是基因的问题，可能是引物有问题。
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4楼2013-02-25 09:29:13
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月光碎

新虫 (初入文坛)
可以构建到载体里面去
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10楼2013-02-28 14:42:46
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