| 查看: 1964 | 回复: 3 | ||
xiaoyang123金虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR后测序，blast最高匹配度只有32%
|
|
PCR后电泳跑出了特异性的单带，PCR产物再次用原引物PCR，提高产物浓度，测序。 以下是测序公司返回的结果： 引物 现象判别 可能原因 建议方案 引物1： 测序无信号 重新提供样品 引物2： 测序结果出现套峰 样品存在片段大小相近的非特异性扩增，而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致 优化反应条件重新提供样品测序 根据测序公司给出的测序结果，在NCBI上比对，只有后200bp左右有匹配（产物840bp），且匹配度只有76%左右。 疑问1：常见菌的基因全序列在Genebank上是否都有登录呢，如果是这样的话，扩增出得任意一段序列，在测序结果没有问题的情况下，是否都能够比对出结果呀？ 疑问2：测序无信号，通常是什么原因导致的呢？ 疑问3：电泳显示出特异性的单带，而且用的是HS Taq，高特异性聚合酶，测序结果为何出现严重套峰？是否应解释为有两条长度相同，引物相同的片段呢？这个可能几率有多大呢？ 新手上路，总是遇到各种各样诡异的结果，还望各位不吝赐教。  |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有121人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为何PCR产物测序只测一部分？
已经有9人回复
- PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
已经有10人回复
- PCR测序结果出来后怎样在NCBI上进行比对？求各位高手帮忙！
已经有12人回复
- pcr产物测序问题
已经有10人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- 细菌16s pcr原液测序问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR产物测序总是不对
已经有13人回复
- 【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因？
已经有5人回复
- 【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物，再怎么区分呢？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR产物直接测序，不出峰，啥原因？
已经有11人回复
gaoyang636
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 202 (大学生)
- 金币: 4111.4
- 散金: 7
- 红花: 14
- 帖子: 1108
- 在线: 159.8小时
- 虫号: 384065
- 注册: 2007-05-27
- 专业: 基因组学
2楼2011-11-24 16:42:43
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10643.1
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3706
- 在线: 792小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2011-11-24 19:22:56
4楼2012-03-27 21:56:02
