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xiaoyang123金虫 (小有名气)
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PCR后测序,blast最高匹配度只有32%
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PCR后电泳跑出了特异性的单带,PCR产物再次用原引物PCR,提高产物浓度,测序。 以下是测序公司返回的结果: 引物 现象判别 可能原因 建议方案 引物1: 测序无信号 重新提供样品 引物2: 测序结果出现套峰 样品存在片段大小相近的非特异性扩增,而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致 优化反应条件重新提供样品测序 根据测序公司给出的测序结果,在NCBI上比对,只有后200bp左右有匹配(产物840bp),且匹配度只有76%左右。 疑问1:常见菌的基因全序列在Genebank上是否都有登录呢,如果是这样的话,扩增出得任意一段序列,在测序结果没有问题的情况下,是否都能够比对出结果呀? 疑问2:测序无信号,通常是什么原因导致的呢? 疑问3:电泳显示出特异性的单带,而且用的是HS Taq,高特异性聚合酶,测序结果为何出现严重套峰?是否应解释为有两条长度相同,引物相同的片段呢?这个可能几率有多大呢? 新手上路,总是遇到各种各样诡异的结果,还望各位不吝赐教。 |
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