应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一个平板上挑取不同菌落得到的测序结果不一样
161/2返回列表12下一页
查看: 1865  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuminzorro

木虫 (小有名气)

[求助] 一个平板上挑取不同菌落得到的测序结果不一样

做克隆测序时，我将PCR产物切胶回收，连接转化到感受态细胞中，进行蓝白斑筛选后，一个平板上挑去3个单克隆，菌液PCR结果显示是阳性克隆，然后将菌液送去测序，但测序结果3个中只有一个是我的目的序列。求高手帮助解释一下！谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-14 14:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shen_41745

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yuminzorro: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-14 19:56:23
一是你用于扩展PCR的酶是高保真酶吗？二即使出现假阳性克隆也很正常啊，只要有正确的出来就行啦！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-11-14 16:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yuminzorro

木虫 (小有名气)
在线等啊……
回复此楼
2楼2012-11-14 14:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuminzorro: 金币+2 2012-11-14 19:56:32
蓝白斑筛选经常会出现这样的情况，如果有酶切位点建议测序之前自己可以鉴定一下
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-14 14:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuminzorro: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-11-14 19:56:39
你如何确定自己的是阳性？PCR？这个不可信，没有酶切吧？
只有酶切正确的才是阳性，不然就会出现你这种情况，很明显，你送去测序的菌株里面有两个都是假阳性.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-11-14 14:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuminzorro

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-11-14 14:54:26
你如何确定自己的是阳性？PCR？这个不可信，没有酶切吧？
只有酶切正确的才是阳性，不然就会出现你这种情况，很明显，你送去测序的菌株里面有两个都是假阳性.

我没有进行酶切鉴定，直接对菌液进行扩增，电泳显示条带大小和我的目的产物大小一致啊。这样鉴定不行吗/
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-14 15:21:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuminzorro at 2012-11-14 15:21:30
我没有进行酶切鉴定，直接对菌液进行扩增，电泳显示条带大小和我的目的产物大小一致啊。这样鉴定不行吗/...

不可以，起码是不准确~可以酶切的话一定要酶切！
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-11-14 15:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuminzorro

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Marado at 2012-11-14 15:29:06
不可以，起码是不准确~可以酶切的话一定要酶切！...

这样的话是不是要在我引物上设计酶切位点啊！
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-14 15:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shen_41745

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种现象很正常啊！！！
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-14 15:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by yuminzorro at 2012-11-14 15:50:42
这样的话是不是要在我引物上设计酶切位点啊！...

不需要，直接切载体自带酶切位点
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
10楼2012-11-14 17:07:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuminzorro 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 计算机22408 281分，求调剂 +7 17715607211 2026-04-06 7/350 2026-04-12 00:43 by xuxiang
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 求调剂 +6 小聂爱学习 2026-04-11 9/450 2026-04-11 21:20 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-10 14/700 2026-04-11 16:02 by vgtyfty
[考研] 295求调剂 +3 桂秋二十八 2026-04-05 5/250 2026-04-11 11:36 by zhq0425
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 生物与医药调剂 +5 十七sa 2026-04-05 5/250 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 338求调剂 +5 小猪红色 678 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:18 by 乔哒哒哒
[考研] 372分材料与化工（085600）英二数二求调剂 +4 蓝笺片 2026-04-06 4/200 2026-04-07 12:30 by dongzh2009
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭