【答案】应助回帖

要适应生活，才能改变生活！

11楼2012-11-14 18:02:39

yuminzorro

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8楼: Originally posted by shen_41745 at 2012-11-14 15:59:56
这种现象很正常啊！！！

能办忙解释一下吗?

12楼2012-11-14 18:47:55

yuminzorro

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9楼: Originally posted by shen_41745 at 2012-11-14 16:02:19
一是你用于扩展PCR的酶是高保真酶吗？二即使出现假阳性克隆也很正常啊，只要有正确的出来就行啦！

用的是LA tap，能帮忙解释一下出现假阳性克隆的原因吗？谢谢！

13楼2012-11-14 19:02:23

lvbobo823

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【答案】应助回帖

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yuminzorro: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-14 19:56:07

很正常，尤其你的模板比较复杂时P出的片段不一定是你想要的目的片段。

hehe

14楼2012-11-14 19:42:55

sxxuan

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【答案】应助回帖

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yuminzorro: 金币+5 2012-11-16 11:27:57

PCR很容易出现假阳性，环境中的PCR产物污染。还有平板中残留的污染，理论上宿主细胞会分泌核酸酶把外来的片段都消化掉，所以哪怕有连接产物没有成功转入宿主细胞，最后都会被降解掉。但我个人觉得这只是理论，实际上有没有残留也是很难讲的。
PCR过程中所产生的序列，并不一定都是完全扩增出目的序列，可能只是部分序列并不完整，但仍在引物检测范围内。如果转化后挑菌是阳性就肯定是都是目的序列，测序公司就赚少很多钱了。
避免假阳性的比较好的方面是利用载体上的引物和目的序列的引物进行PCR验证，如果只是一两个克隆就觉得无所谓，如果做很多克隆的话，每次验证都要换一条引物还有优化体系的话，是很麻烦的事情。
如果你的引物本身没有酶切位点的话，可以用载体上的酶切位点试试。PCR加上酶切加上测序，才是最可靠的。good luck

你的日子如何，你的力量也必如何！

15楼2012-11-16 09:16:42

ducktk

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【答案】应助回帖

你的片段多大？菌落PCR经常扩出假阳性的来，尤其是小片段。

16楼2012-12-23 10:50:28