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zxd95至尊木虫 (著名写手)
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[交流]
基因组PCR的问题 已有3人参与
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最近，想扩增红皮梨WD40基因的启动子；现在已知WD40的cDNA序列，设计特异性引物SP3；已知砀山梨（非红皮梨）WD40的基因组序列，在砀山梨WD40基因ATG上游1300 bp处设计特异性引物WD40-F；现在以红皮梨基因组为模板，使用SP3和WD40-F进行PCR扩增，W泳道获得一大一小两个条带；作者认为量太少，就进行分别切胶、液氮冷冻、离心，获得溶胶液100 ul；分别以这两种溶胶液为模板（50 ul体系取4 ul和2 ul）进行PCR扩增，结果如后一个图，条带模糊。这是怎么回事？是不是需要重新以基因组为模板进行PCR扩增，连T后测序？ 以红皮梨基因组为模板，使用SP3和WD40-F进行PCR扩增的结果  WD40-L和WD40-S分别为以上图W泳道的大片段和小片段为模板，SP3和WD40-F进行PCR扩增的结果 |
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2楼2012-08-02 13:23:30
wu_shiyong
银虫 (正式写手)
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3楼2012-08-02 13:36:15
ghs25372216
禁虫 (正式写手)
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4楼2012-08-02 16:45:07
