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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组PCR的问题
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 基因组PCR的问题 已有3人参与

最近，想扩增红皮梨WD40基因的启动子；现在已知WD40的cDNA序列，设计特异性引物SP3；已知砀山梨（非红皮梨）WD40的基因组序列，在砀山梨WD40基因ATG上游1300 bp处设计特异性引物WD40-F；现在以红皮梨基因组为模板，使用SP3和WD40-F进行PCR扩增，W泳道获得一大一小两个条带；作者认为量太少，就进行分别切胶、液氮冷冻、离心，获得溶胶液100 ul；分别以这两种溶胶液为模板（50 ul体系取4 ul和2 ul）进行PCR扩增，结果如后一个图，条带模糊。这是怎么回事？是不是需要重新以基因组为模板进行PCR扩增，连T后测序？

以红皮梨基因组为模板，使用SP3和WD40-F进行PCR扩增的结果



WD40-L和WD40-S分别为以上图W泳道的大片段和小片段为模板，SP3和WD40-F进行PCR扩增的结果
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追梦的人
1楼 2012-08-01 19:40:45
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zhcosa

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主觉得下面的图模糊吗，为毛我觉得挺好哇？可以连接切胶连接转化送测序了吧。。。。

话说上面那个图的量也不少哇，够用了吧
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2楼2012-08-02 13:23:30
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LZ  是想做测序吗？PCR产物和引物直接送公司测序就行，不用再连载体！你的PCR产物亮度足够测序啦！
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低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-08-02 13:36:15
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-03 13:42:28
本帖内容被屏蔽
4楼2012-08-02 16:45:07
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