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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌转化技术--PCR获取线性化片段和限制性内切酶获取线性化片段的区别?
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547star

木虫 (著名写手)

[交流] 真菌转化技术--PCR获取线性化片段和限制性内切酶获取线性化片段的区别?

想了解一下真菌,特别是丝状真菌的转化,有直接用质粒的,也有限制性内切酶介导的,还有线性化片段的(包括酶切和PCR）。有看到说限制性内切酶介导法比质粒直接转化效率高几倍，想知道高重复性转化的效率哪种更高，觉得PCR法更简单，求两种线性化片段转化原理上的区别。
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1楼 2012-05-13 22:14:32
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liufuliang

新虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
547star(金币+1): 谢谢参与
547star: 金币+3, 3S 2012-05-13 23:29:39
547star: 金币+7, 农杆菌据文献报道是不错，但是菌和载体难找啊。宝生物的据说不好用。 2012-05-25 17:12:39
建议你查农杆菌介导的方法。该方法成功率高。建库后，多拷贝低，后续的反向克隆基因更简单。
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2楼2012-05-13 22:25:28
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
547star(金币+1): 谢谢参与
547star: 金币+5, 3s 2012-05-15 19:29:09
限制性内切酶介导法与质粒直接转化效率大同小异，关键在于原生质体的质量。PCR片段直接转化效果还是不错的...
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5楼2012-05-15 19:12:05
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yangy1220

新虫 (职业作家)
★
547star(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
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7楼2012-05-15 19:30:22
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★ ★ ★ ★ ★ ★
547star(金币+1): 谢谢参与
547star: 金币+5, 辛苦了 2012-05-15 21:13:41
http://wenku.baidu.com/view/d19b93244b35eefdc8d3334e.html
http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10434-2007135480.htm
http://www.doc88.com/p-54389919102.html
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-HHGZ200707011.htm
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8楼2012-05-15 19:37:52
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爱莫若月

木虫 (小有名气)
★
547star(金币+1): 谢谢参与
楼主有转化的载体吗
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9楼2012-06-09 23:09:58
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158007k

新虫 (初入文坛)
★
547star(金币+1): 谢谢参与
PCR线性化后 还需要后续处理吗？比如切胶回收？
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10楼2013-12-09 12:24:21
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简单回复
20119283023楼
2012-05-13 22:30   回复  
547star(金币+1): 谢谢参与
8673929494楼
2012-05-13 22:44   回复  
547star(金币+1): 谢谢参与
wlxwlx10266楼
2012-05-15 19:21   回复  
547star(金币+1): 谢谢参与
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