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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] PCR重复不出来已有15人参与

]这个是五一前做的一次pcr,条带也不怎么亮,用的是简并引物,3000bp处是我要的,当时三个平行出来了一个,五一回来就做不出来了,用pcr产物p也p不出来,用基因组也p不出来,基本上条件都没怎么变,求助下面该怎么做,还有这几次做的下面的引物二聚体要比五一前的这次亮一些,但是上面就是没条带,伤不起的劳动节啊


[ Last edited by xzx018 on 2012-5-4 at 10:25 ]
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-05-04 17:55:12
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。
2楼2012-05-04 12:42:53
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by skkyy88888 at 2012-05-04 12:42:53:
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。

这个是用extaq扩的,takara的,说明书上写的是可以扩长片段。换了康为世纪的LA酶做,连条带都没有,很是郁闷
3楼2012-05-04 14:30:32
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+1, 蛋疼的MM不多见,安慰一下 2012-05-07 16:46:52
一样遭遇的经过

还在蛋疼中  T T
会不会偶尔也会想起我....
4楼2012-05-04 15:38:10
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+3, 鼓励分享和交流 2012-05-04 17:55:36
看你要干什么,如果只是为了检测,没有后续工作,可以使用extaq或者LA taq。但是说心里话,我用了5、6年的感觉就是这两种酶都垃圾得很!耽误了我数不清的时间。

如果你们实验室有钱,我推荐你买TAKARA的Primestar 这种酶,两百多一支,扩增效果非常好,绝对省时,这是最重要的,而且综合成本也未必就比用前两种酶贵。
天命所归,各安其位
5楼2012-05-04 15:52:39
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决战者

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能是酶失活了。换个酶试试。
6楼2012-05-04 16:17:25
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 决战者 at 2012-05-04 16:17:25:
有可能是酶失活了。换个酶试试。

酶都是新的啊  本来五一前忽然有结果了,开开心心过五一,结果回来。。。。。今天一天没做了,很郁闷缓缓心
7楼2012-05-04 16:44:45
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lys6827

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+1, 谢谢参与 2012-05-07 16:47:30
检测下你的模板是不是降解了,如果因为降解而导致模板浓度比较低的话,那就要看你愿不愿意花钱买好的PCR扩增酶
8楼2012-05-05 09:46:18
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-05-08 06:33:39
用talara的LA Taq扩3k和6k的片段,效果貌似都不好。不知LA Taq的扩增条件有何特殊要求,说明书上表示的不是很明确。
Primestar扩长片段效果怎么样呢?
9楼2012-05-05 13:25:25
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姜传军

金虫 (小有名气)

这个真得看人品
风逝
10楼2012-05-05 14:05:49
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