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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] PCR重复不出来已有15人参与

]这个是五一前做的一次pcr,条带也不怎么亮,用的是简并引物,3000bp处是我要的,当时三个平行出来了一个,五一回来就做不出来了,用pcr产物p也p不出来,用基因组也p不出来,基本上条件都没怎么变,求助下面该怎么做,还有这几次做的下面的引物二聚体要比五一前的这次亮一些,但是上面就是没条带,伤不起的劳动节啊


[ Last edited by xzx018 on 2012-5-4 at 10:25 ]
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

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2楼: Originally posted by skkyy88888 at 2012-05-04 12:42:53:
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。

这个是用extaq扩的,takara的,说明书上写的是可以扩长片段。换了康为世纪的LA酶做,连条带都没有,很是郁闷
3楼2012-05-04 14:30:32
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

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6楼: Originally posted by 决战者 at 2012-05-04 16:17:25:
有可能是酶失活了。换个酶试试。

酶都是新的啊  本来五一前忽然有结果了,开开心心过五一,结果回来。。。。。今天一天没做了,很郁闷缓缓心
7楼2012-05-04 16:44:45
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上,终究还是重复出来了,谢谢ls各位啊

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

15楼2012-05-07 22:05:07
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by pinghang0716 at 2012-09-28 09:06:46
是怎么弄出来的?我也一直重复不出来,很郁闷。。...

现在感觉模板太重要了,反复冻融对模板伤害很大,而且刚开始提的基因组要亮才行
17楼2012-09-28 18:55:05
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

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19楼: Originally posted by x452659189 at 2013-01-19 21:03:16
我想借楼主的话强调一句,做pcr模板是第一重要的,至于退火温度,taq酶种类,都是次要的。

确实深刻体会到了这句话
20楼2013-01-19 21:50:11
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