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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR重复不出来
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] PCR重复不出来 已有15人参与

]这个是五一前做的一次pcr，条带也不怎么亮，用的是简并引物，3000bp处是我要的，当时三个平行出来了一个，五一回来就做不出来了，用pcr产物p也p不出来，用基因组也p不出来，基本上条件都没怎么变，求助下面该怎么做，还有这几次做的下面的引物二聚体要比五一前的这次亮一些，但是上面就是没条带，伤不起的劳动节啊


[ Last edited by xzx018 on 2012-5-4 at 10:25 ]
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1楼 2012-05-04 10:24:21
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-05-04 17:55:12
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。
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2楼2012-05-04 12:42:53
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by skkyy88888 at 2012-05-04 12:42:53:
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。

这个是用extaq扩的，takara的，说明书上写的是可以扩长片段。换了康为世纪的LA酶做，连条带都没有，很是郁闷
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3楼2012-05-04 14:30:32
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+1, 蛋疼的MM不多见，安慰一下 2012-05-07 16:46:52
一样遭遇的经过

还在蛋疼中  T T
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会不会偶尔也会想起我....
4楼2012-05-04 15:38:10
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+3, 鼓励分享和交流 2012-05-04 17:55:36
看你要干什么，如果只是为了检测，没有后续工作，可以使用extaq或者LA taq。但是说心里话，我用了5、6年的感觉就是这两种酶都垃圾得很！耽误了我数不清的时间。

如果你们实验室有钱，我推荐你买TAKARA的Primestar 这种酶，两百多一支，扩增效果非常好，绝对省时，这是最重要的，而且综合成本也未必就比用前两种酶贵。
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天命所归，各安其位
5楼2012-05-04 15:52:39
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决战者

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能是酶失活了。换个酶试试。
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6楼2012-05-04 16:17:25
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 决战者 at 2012-05-04 16:17:25:
有可能是酶失活了。换个酶试试。

酶都是新的啊  本来五一前忽然有结果了，开开心心过五一，结果回来。。。。。今天一天没做了，很郁闷缓缓心
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7楼2012-05-04 16:44:45
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lys6827

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+1, 谢谢参与 2012-05-07 16:47:30
检测下你的模板是不是降解了，如果因为降解而导致模板浓度比较低的话，那就要看你愿不愿意花钱买好的PCR扩增酶
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8楼2012-05-05 09:46:18
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xiaoyang123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-05-08 06:33:39
用talara的LA Taq扩3k和6k的片段，效果貌似都不好。不知LA Taq的扩增条件有何特殊要求，说明书上表示的不是很明确。
Primestar扩长片段效果怎么样呢？
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9楼2012-05-05 13:25:25
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姜传军

金虫 (小有名气)
这个真得看人品
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风逝
10楼2012-05-05 14:05:49
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