24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2009  |  回复: 9

zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR 之前能P出来,后来就重复不出来了已有5人参与

前两天菌落刚长出来的时候做的PCR,感觉菌落比较小不晓得能不能P出来就试了试,结果能出现目的条带,然后等菌又张了两天后菌落变大后又做了两次重复,菌落是一样的,程序,酶都是一样的,可结果就是什么都么有,很郁闷,不知道什么原因,求助啊!!!真的想不通哪个环节出错了,菌落都是一样的,条件也都是一样的,到底是为什么呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhaoxiaopang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-29 18:19:12
菌落PCR假阳性很正常,质粒丢失也不是没有可能
只有不断地失败才会成功
2楼2014-04-29 10:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道什么原因,我都是把单菌落摇起来,做菌液pcr,其他的菌液也方便保存,这样不容易出错
3楼2014-04-29 10:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-29 10:06:30
菌落PCR假阳性很正常,质粒丢失也不是没有可能

那是说我的菌都是假阳性?但是刚转化后挑的菌落做的PCR也是能P出来,只是引物特异性不太好,后来换的引物又P的,结果就出现这样子。我P的是基因组上的片段,跟质粒么有关系
4楼2014-04-29 10:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-04-29 10:14:50
那是说我的菌都是假阳性?但是刚转化后挑的菌落做的PCR也是能P出来,只是引物特异性不太好,后来换的引物又P的,结果就出现这样子。我P的是基因组上的片段,跟质粒么有关系...

额,不好意思我以为你的是重组质粒菌,那就再试试你之前的引物呗,行的话就是引物的问题了
只有不断地失败才会成功
5楼2014-04-29 10:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实菌P最好不要用你基因上的引物,最好使用你载体上的通用引物,这样正确率比较高。
6楼2014-04-29 10:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

如果你PCR手法好的话,那么假阳性的概率很大
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
7楼2014-04-29 18:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你取的模板菌落的量是不是太大?菌落小的时候,通常不会有太大问题,菌落太大,容易取模板太多,影响还是会有一些的
8楼2014-04-30 05:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天际雾影

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果第一次你P的结果是全都有的话,很有可能是假阳性。但做好的方法是把你有条带的菌落选两个摇菌,最后提质粒在验证一下。
9楼2014-05-01 22:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

99蜗牛99

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-04-29 10:14:50
那是说我的菌都是假阳性?但是刚转化后挑的菌落做的PCR也是能P出来,只是引物特异性不太好,后来换的引物又P的,结果就出现这样子。我P的是基因组上的片段,跟质粒么有关系...

我也是p基因组,之前能有条带,现在变小了,请问您的问题解决了吗,还请指点迷津呢。。
10楼2015-10-21 09:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaoxiaopang 的主题更新
信息提示
请填处理意见