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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR求助
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Biohydrogen

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR求助 已有9人参与

我做菌落PCR，为什么跑电泳的时候DNA只在点样井口呢？量较大，按理说不应该是基因组，哪位知道这是这么回事？多谢了！
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1楼 2010-10-02 13:55:40
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-02 19:35:46
我有过这种情况，是因为胶没做好...
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2楼2010-10-02 15:43:49
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ddychenhua

新虫 (小有名气)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-02 19:35:49
你用的是菌落加入PCR体系还是摇菌后用的菌液？如果是菌落直接加的，有可能是你把培养基挑到体系里了，影响了电泳。建议先摇菌再PCR~好运~
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相信自己的信念
3楼2010-10-02 16:55:36
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Biohydrogen

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Biohydrogen at 2010-10-02 13:55:40:
我做菌落PCR，为什么跑电泳的时候DNA只在点样井口呢？量较大，按理说不应该是基因组，哪位知道这是这么回事？多谢了！

但是marker跑得很好啊
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4楼2010-10-02 19:51:30
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ddychenhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Biohydrogen at 2010-10-02 19:51:30:

但是marker跑得很好啊

因为marker没有加菌落呀，呵呵~我说的有可能是培养基污染了体系，marker不存在这个问题。
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相信自己的信念
5楼2010-10-02 21:48:34
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ddychenhua

新虫 (小有名气)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-05 15:04:37
引用回帖:
Originally posted by Biohydrogen at 2010-10-02 19:51:30:

但是marker跑得很好啊

我以前有过这样的问题，就是直接菌落长出来后，直接挑到PCR管中进行PCR，挑的比较用力把培养基带到体系里了，所以电泳的时候受到影响，和你说的结果有点像。我不知道你是不是也是这个问题。后来我就先把菌从培养皿里挑出来先摇菌，用菌液进行PCR，这样跑的电泳就比较好了。我不知道你的情况和我的是不是一样
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相信自己的信念
6楼2010-10-02 21:52:14
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怎么都行

银虫 (小有名气)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-05 15:04:42
会不会是你菌体挑的太多了，大量的蛋白裂解产物妨碍了核酸的泳动？
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7楼2010-10-02 23:49:01
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凡龙

金虫 (著名写手)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-05 15:04:49
引用回帖:
Originally posted by ddychenhua at 2010-10-02 16:55:36:
你用的是菌落加入PCR体系还是摇菌后用的菌液？如果是菌落直接加的，有可能是你把培养基挑到体系里了，影响了电泳。建议先摇菌再PCR~好运~

有的时候是要靠运气，有时就是没有原因，再细致的重新做一次吧
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8楼2010-10-02 23:54:25
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ddychenhua

新虫 (小有名气)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-05 15:04:56
引用回帖:
Originally posted by 凡龙 at 2010-10-02 23:54:25:

有的时候是要靠运气，有时就是没有原因，再细致的重新做一次吧

Maybe~
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相信自己的信念
9楼2010-10-03 00:12:45
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
Biohydrogen(金币+1): 2010-10-05 15:05:08
建议不要直接做菌液或者菌落PCR，假阳性的几率很大，还是提了质粒再进行后续试验吧，不会耽误多少时间的
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10楼2010-10-04 23:06:37
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