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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于菌落PCR
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于菌落PCR 已有11人参与

前几天做了一次菌落PCR，菌里有质粒，我是想验证质粒有没有转进去，结果没有扩增出目标条带，以质粒为模板进行对照，有目标条带。这是什么原因呢？这个质粒是低拷贝的，望高人指点。
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1楼 2010-07-29 15:47:14
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louli

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-07-29 19:35:42
你的描述有点模糊
你的意思是：挑单菌落要的菌液直接PCR没有带是吗？如果这样的话可能是假阳性！
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2楼2010-07-29 17:28:56
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-07-29 17:28:56:
你的描述有点模糊
你的意思是：挑单菌落要的菌液直接PCR没有带是吗？如果这样的话可能是假阳性！

我是直接从斜面上挑菌做的菌落PCR，没有扩增出目标条带。而以质粒为模板，扩增出了目标条带
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3楼2010-07-29 18:08:49
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tongyanna

金虫 (正式写手)
学习学习啊，呵呵呵
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自己的路，自己快乐的走
4楼2010-07-29 19:16:23
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noheartman

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-29 19:35:54
菌落PCR如果没有扩增出目的片段，那就是重组质粒没有转进去
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5楼2010-07-29 19:20:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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转染失败的可能性比较大
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6楼2010-07-29 20:12:58
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huofuman

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是没有转进去，多挑几个菌落做看看
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7楼2010-07-29 20:56:58
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louli

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-30 08:19:06
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-07-29 18:08:49:




   我是直接从斜面上挑菌做的菌落PCR，没有扩增出目标条带。而以质粒为模板，扩增出了目标条带

你是说提完质粒之后PCR有带是吗？但是我觉得菌液PCR的性质跟质粒PCR一样。你提完质粒之后跑胶了吗？有带吗？我做的时候出现了质粒没带，质粒PCR有带。这可能是因为PCR特性太强了！
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8楼2010-07-30 07:47:38
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xiaoru2010

★
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引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-07-29 15:47:14:
前几天做了一次菌落PCR，菌里有质粒，我是想验证质粒有没有转进去，结果没有扩增出目标条带，以质粒为模板进行对照，有目标条带。这是什么原因呢？这个质粒是低拷贝的，望高人指点。

你的片段多大？连接了多久？应该是没连接上，我之前也遇到过，后来1000以上的片段都连接24小时才可以的
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9楼2010-07-30 08:44:54
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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挑菌落，提质粒，酶切验证~这是最有说服力的~PCR不具备说服力，
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10楼2010-07-30 11:58:32
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