[交流] 【求助/交流】RFLP实验中菌落PCR分析

Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-20 17:05:55:
你连总DNA到载体上？？你确定不是总DNA提取后然后扩增目的基因，然后再连接至载体？？

或许我误解你的意思了，最好能再写详细一些。

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-20 at 17:07 ]

Originally posted by 宁夏8083 at 2010-12-20 19:27:44:
我的经验不是这样的，以前经常在做转化后的鉴定，因为再扩体积提质粒还要半天时间，通常就会做菌落PCR，结果都是可以在5个左右出来一个阳性克隆的，最多的我们实验室有个同学做了48个菌落，也有2-3个阳性的。我想 ...

Originally posted by 凌-强 at 2010-12-21 20:25:15:




我回收后检测了，我的目的片段是完整的，我现在只是做到挑单个菌落划线，然后做菌落PCR，就到这里，检测阳性克隆，但是做了25个了，全部都是阴性克隆，所以怀疑是不是没有连接上。