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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有没有同学做过16S rDNA PCR-RFLP，交流
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kiki1289

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有没有同学做过16S rDNA PCR-RFLP，交流 已有6人参与

选了4种酶做16S酶切，效果不好 ，条带不多且不清楚，请问有做过的同学吗？大家交流。
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1楼 2010-05-08 17:50:19
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kiki1289

银虫 (小有名气)
留下QQ EMAIL都行 谢谢
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2楼2010-05-08 17:52:25
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zhangjingfei01

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
就1500bp左右的片段，酶切位点多不？
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3楼2010-05-08 19:19:07
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zhangjingfei01

木虫 (正式写手)
★
plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-10 03:29:28
都是直接PCR扩增出来，送测序的。
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4楼2010-05-08 19:20:08
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hongrunge

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+3):欢迎交流 2010-05-10 03:29:41
条带不多问题：选用4碱基内切酶。内切酶识别碱基过多容易造成条带较少。采用4碱基内切酶双酶切16S分型有效率可以达到95%以上，一般双酶切就够了。
条带不清楚问题：建议用PAGE跑，然后用银染。PAGE分辨率高，银染灵敏度好。但是具体操作起来要略微摸下电泳条件。
16S rDNA PCR-RFLP网上有很多文献，楼主可以多看下
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5楼2010-05-08 19:52:33
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kiki1289

银虫 (小有名气)
谢谢大家的热心回复 谁知双酶切的体系怎么确定 我暂时没有查到
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6楼2010-05-09 15:43:40
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ZJY1110

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提取了总DNA，直接用扩增16S rDNA的引物进行扩增
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7楼2010-05-10 09:00:56
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gayalynau

铁杆木虫 (著名写手)

嗨
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接测序就行了，为什么还要RFLP
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嗨
8楼2010-05-10 10:55:18
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cherishagnes

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
条带不清楚考虑一下是不是电泳液和电压的问题，电泳液要勤换，不然图出来脏脏的，电压不稳条带也不清楚。
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9楼2013-12-13 10:15:51
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