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忆-雪

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[求助] 急求RT-PCR电泳图分析已有1人参与

急求各位高手忙我分析分析这是什么原因，第一张和第3张图右边的条带呈涂抹状，这是为什么？
图1：退火温度55度，为什么与marker相邻的两孔目的条带上下有条带，而另外两空却没有？（前两空和后两空模板合成时间不一样，后两孔模板合成快1周了，前两空是今天合成的。）
图2：退火温度58度，为什么后面几个条带呈涂抹状，是因为退火温度太高了吗？内参条带很亮，内参条带旁边的两空的条带跟我参考的文献片段长短不一样，文献报道是266bp,而我扩增出来的是300多bp，我合成的引物跟文献完全一致，这是为什么，难道这不是我的目的基因吗？我重复试验3次，结果都一样。
图3：退火温度48度，结果同图2后面条带一致，呈涂抹状，我试过50度，55度，结果都是涂抹状，这是为什么?
扩增体系是20ul,其中引物1ul,cDNA2ul
PCR条件：94度，5min;94度 30s;退火温度上述温度；72度45s，循环30次，72度 7min.

现在很是惆怅，希望各位高手帮我这菜鸟分析分析！

内参图，退火温度55度

内参和样品图

48度样品图

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1楼2012-03-29 00:06:09

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忆-雪

银虫 (小有名气)

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西瓜: 回帖置顶 2012-04-02 11:36:46

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atlanticwi

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+2, 热心啊，分子版太喜欢你了 2012-03-29 10:22:41
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，对我很有帮助 2012-03-30 10:18:07
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-21 01:57:15