| 查看: 4701 | 回复: 22 | |||
忆-雪银虫 (小有名气)
|
[求助]
急求RT-PCR电泳图分析 已有1人参与
|
||
|
急求各位高手忙我分析分析这是什么原因，第一张和第3张图右边的条带呈涂抹状，这是为什么？ 图1：退火温度55度，为什么与marker相邻的两孔目的条带上下有条带，而另外两空却没有？（前两空和后两空模板合成时间不一样，后两孔模板合成快1周了，前两空是今天合成的。） 图2：退火温度58度，为什么后面几个条带呈涂抹状，是因为退火温度太高了吗？内参条带很亮，内参条带旁边的两空的条带跟我参考的文献片段长短不一样，文献报道是266bp,而我扩增出来的是300多bp，我合成的引物跟文献完全一致，这是为什么，难道这不是我的目的基因吗？我重复试验3次，结果都一样。 图3：退火温度48度，结果同图2后面条带一致，呈涂抹状，我试过50度，55度，结果都是涂抹状，这是为什么? 扩增体系是20ul,其中引物1ul,cDNA2ul PCR条件：94度，5min;94度 30s;退火温度上述温度；72度45s，循环30次，72度 7min. 现在很是惆怅，希望各位高手帮我这菜鸟分析分析！  内参图，退火温度55度  内参和样品图  48度样品图 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有185人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环形质粒酶切电泳图分析求解
已经有25人回复
- 大家帮忙分析下双向电泳结果不好的原因（有图）
已经有11人回复
- PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧
已经有12人回复
- 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。
已经有11人回复
- 高手帮忙分析下RT-PCR电泳图
已经有3人回复
- 琼脂糖凝胶电泳图分析
已经有40人回复
- 求高手帮我分析下 PCR 实验电泳图，怎么改善！！！
已经有6人回复
- 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
已经有5人回复
- 这样的RNA电泳图，能不能做RT-PCR
已经有9人回复
- 大家帮忙分析一下PCR电泳图
已经有14人回复
- 【求助/交流】帮我分析一下RNA电泳图
已经有20人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 热心啊，分子版太喜欢你了 2012-03-29 10:22:41
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，对我很有帮助 2012-03-30 10:18:07
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-21 01:57:15
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 热心啊，分子版太喜欢你了 2012-03-29 10:22:41
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，对我很有帮助 2012-03-30 10:18:07
忆-雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-21 01:57:15
|
嗯 个人看法： 1. 这种涂抹，也就是Smear，简称弥散带，在条带上还是条带下Smear都是有讲究的，一般单单是上部Smear普遍是Template过量，上下都Smear就问题多了，退火时间长、退火温度低等等太多了，建议找TaKaRa官方网站去看问题集解，会有详细说明。单单条带下Smear，我还没有见过........ 2. 图二，有特异产物范围内的Smear，恰恰与你说法相反，退火温度可能过低了，需要5度5度往上调做大范围尝试，再2度微调，还有你认为条带范围不符，那很正常，我觉得在测序前一切都不好说，因为酶Buffer引起条带滞后性，因为胶没混匀引起滞后性偶都见过，还有一次，我对比Marker发现我克隆的Gene高了数百bp，最后去测序，其实是正确滴。 3. 图三，有根据你的引物来优化你的Tm吗？看你从48试到55......变化范围蛮大.....其实我感觉若你图三的扩增子长也是300左右bp的话，结合你变性温度和时间，应该用的是普通Taq，45s的延伸未免就太长了，45s的话Taq都能延1kb了，所以时间也需要优化。 希望能有所帮助  若有说错，请高手指正 |
2楼2012-03-29 00:36:38
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
3楼2012-03-29 00:53:51
lwtong8320
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1087.2
- 散金: 590
- 红花: 2
- 帖子: 571
- 在线: 106.6小时
- 虫号: 644948
- 注册: 2008-11-03
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
9楼2012-03-30 13:00:22
mamadexiao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 5603.5
- 散金: 100
- 红花: 7
- 帖子: 418
- 在线: 78.8小时
- 虫号: 576831
- 注册: 2008-06-21
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2012-03-30 19:34:49
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
4楼2012-03-29 15:12:16
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
5楼2012-03-29 17:35:21
忆-雪
银虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1086.9
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 32.4小时
- 虫号: 1393279
- 注册: 2011-09-07
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
6楼2012-03-30 10:18:59
忆-雪
银虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1086.9
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 32.4小时
- 虫号: 1393279
- 注册: 2011-09-07
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
7楼2012-03-30 10:19:57
忆-雪
银虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1086.9
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 32.4小时
- 虫号: 1393279
- 注册: 2011-09-07
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
8楼2012-03-30 10:30:20
