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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR重复不出来啊，求助啊
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hihe99

银虫 (小有名气)

[求助] PCR重复不出来啊，求助啊 已有1人参与

先前p出来的东西，现在重做，总是p不出来。而且，按50配的体系，分成2管25，在同一个PCR仪上反应，一个有产物一个没有，做了几次了，都这样。如图。
是什么原因啊，该怎么办呢。急啊！！！！

PCR重复不出来啊，求助啊
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1楼 2014-03-23 21:57:23
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Jacob_24

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-24 13:33:31
hihe99: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-28 09:17:26
1，Mix是一样的话 那你确定没P出来的加Enzyme 了？
2，同一个PCR仪？
3，可以换个孔放 试试看
4，你的程序合理否？
5  可以尝试加DMSO 试试看
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CCC
2楼2014-03-24 10:56:44
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-03-24 11:56:44
1，Mix是一样的话 那你确定没P出来的加Enzyme 了？
2，同一个PCR仪？
3，可以换个孔放 试试看
4，你的程序合理否？
5  可以尝试加DMSO 试试看

是先全配制好后再分装的，用的EX taq。
程序是普通的程序，先前也扩出来过
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3楼2014-03-25 19:50:16
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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)
我也出现这种情况，2500bp，p出来两次，之后再也p不出来了，有时候也是两管平行，一管有一管没有，更换所有的试剂，其他人用着没问题，就是我p不出来，你有结论了吗？讨论一下
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4楼2014-04-03 15:54:03
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zeroon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-03-24 10:56:44
1，Mix是一样的话 那你确定没P出来的加Enzyme 了？
2，同一个PCR仪？
3，可以换个孔放 试试看
4，你的程序合理否？
5  可以尝试加DMSO 试试看

请问加DMSO是干嘛用的？谢谢
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5楼2014-04-03 16:42:29
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Jacob_24

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zeroon at 2014-04-03 16:42:29
请问加DMSO是干嘛用的？谢谢...

DMSO为无色无臭粘稠液体,可溶于水和乙醇、丙酮、乙醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂,工业上被用做溶剂和萃取剂.由于其溶于水的特性,故能与PCR的整个反应体系充分混合.作为一种变性剂,DMSO可直接解除模板DNA的局部二级结构,从而增加引物与模板的特异性结合,降低非特异性结合,最终获得满意的扩增效果.另一方面,DMSO浓度过高时又同时使Taq酶变性失活,反而降低扩增效率.DMSO is used in PCR to inhibit secondary structures in the DNA template or the DNA primers. It is added to the PCR mix before reacting, where it interferes with the self-complementarity of the DNA, preventing the occurrence of interfering reactions. However, use of DMSO in PCR increases the mutation rate.
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CCC
6楼2014-04-04 09:38:13
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-04-04 10:38:13
DMSO为无色无臭粘稠液体,可溶于水和乙醇、丙酮、乙醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂,工业上被用做溶剂和萃取剂.由于其溶于水的特性,故能与PCR的整个反应体系充分混合.作为一种变性剂,DMSO可直接解除模板DNA的局部二级结 ...

学习了
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7楼2014-04-07 19:09:05
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zeroon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-04-04 09:38:13
DMSO为无色无臭粘稠液体,可溶于水和乙醇、丙酮、乙醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂,工业上被用做溶剂和萃取剂.由于其溶于水的特性,故能与PCR的整个反应体系充分混合.作为一种变性剂,DMSO可直接解除模板DNA的局部二级结 ...

哦
8楼2014-04-09 17:29:23
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