24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 912  |  回复: 5

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:亚克隆做不出来

TA克隆做完了,然后做亚克隆,是用Nhe I和Hind III分别双酶切表达载体和TA克隆产物,但是现在做亚克隆时转化后总是没有阳性克隆,是什么原因呢?!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫 2012-06-13 13:50:53
要分析原因就太多了
第一,之前TA克隆是否正确
第二,酶切是否切开
第三,培养基抗生素时候加错
第四,连接是否连上
。。。
2楼2012-06-13 10:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bst5 at 2012-06-13 10:41:06
要分析原因就太多了
第一,之前TA克隆是否正确
第二,酶切是否切开
第三,培养基抗生素时候加错
第四,连接是否连上
。。。

TA克隆的测序结果是正确的,只是甘油管保存一个月的话应该不会发生突变吧!
酶切后跑电泳了,条带是在我要的目的片段的大小!
培养基的抗生素应该不会有问题,我是用同一批的板从甘油管中接菌然后转接第二代菌的。
现在最担心的是连接的问题了,但是用的体系是跟以前一样的,之前做的亚克隆的转化有阳性克隆的。
3楼2012-06-13 10:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最好做一个连接的阳性对照,比如同时连一个T载体,看有无阳性克隆,要是有就不是连接的问题啊
4楼2012-06-14 09:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bst5 at 2012-06-14 09:21:48
最好做一个连接的阳性对照,比如同时连一个T载体,看有无阳性克隆,要是有就不是连接的问题啊

嗯,好的,谢谢
5楼2012-06-14 14:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bst5 at 2012-06-14 09:21:48
最好做一个连接的阳性对照,比如同时连一个T载体,看有无阳性克隆,要是有就不是连接的问题啊

连接的阳性对照应该怎么做呢?怎么样连T载体呢?!T载体能自连吗?
6楼2012-07-29 09:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 飘零的叶子 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 329求调剂 +17 miaodesi 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 18:33 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +4 李rien 2026-04-05 4/200 2026-04-05 18:01 by kk112233
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 一志愿上海大学生物学346 +3 上海大学346调剂 2026-04-03 3/150 2026-04-04 20:20 by dongzh2009
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 英一数一408,总分284,二战真诚求调剂 +13 12.27 2026-03-30 15/750 2026-04-03 14:41 by 氮气气气
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 物理学调剂 +4 小羊36 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:16 by lishahe
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
信息提示
请填处理意见