应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？
101/1返回列表
查看: 2989  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

带刀猎人

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？ 已有9人参与

我做菌落PCR，可是每次都P不出来。是因为革兰氏阳性菌菌壁较厚导致的菌体不能裂解吗？所以体系中模板量不足？
我用1%的TRITON- X100裂解后，先对裂解上清跑了一下电泳，结果是菌体能成功裂解，但是基因组DNA不能在胶里泳动，电泳40分钟后大部分DNA都还是在点样孔里。甚至有部分向阴极泳动。
这样的模板能直接加入PCR体系扩增吗？会不会导致扩增产物也是不能在胶里泳动？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-14 20:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):辛苦猴哥了 2010-10-14 22:23:49
革兰氏阳性菌你还用菌液PCR？ 细胞都不知道杀死没

一般大肠杆菌用菌液PCR都很不稳定的

你想P的基因不会在基因组里吧？就算在质粒里也不一定能P出来 何况基因组。

你所描述的电泳根本就不对，如果基因组提出来了 肯定是会移动的 在点样孔里的不是核酸
赞一下(2人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2010-10-14 21:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)
我想是不是因为triton-X100的粘度比较大导致点样孔里的DNA不能泳动，还有就是triton使DNA带了正电荷，因为在紫外灯下可以看到明显的后移条带。我是扩增16srDNA我们实验室以前都是用菌落PCR的，能扩增出来，可我就是扩不出来，郁闷！

老大，再给指教指教吧！
赞一下 回复此楼
3楼2010-10-15 10:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议提质粒进行PCR，菌落PCR很不准的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-15 10:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hulqi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
电泳反着跑？插错电极没 ？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-10-15 11:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwk123

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
6楼2010-10-15 11:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你所用的PCR试剂有无问题？新划板革兰氏阴性菌一般PCR是可以P出条带的，不过挑菌体挑多了也会P不出来！
赞一下(1人) 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
7楼2010-10-15 12:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天龙n部

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们好像很好P啊，你不会没连上目的基因吧
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-10-15 13:55:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丰之第

铜虫 (正式写手)

小牛

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可能是把培养基挑在里面了。建议先处理，后pcr。多看看文献。我也做过你上面的实验，刚开始都这样。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-15 15:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biowandy

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌落 PCR假阳性很高才对啊 ，  不过一般加热时间够长 不可能不会破碎， 应该是模板量不够，
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-10-15 16:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 带刀猎人 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 3/150 2026-03-15 17:32 by 小物理化学
[考研] 290求调剂 +3 孔志浩 2026-03-12 8/400 2026-03-15 15:30 by 孔志浩
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭