应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？
51/1返回列表
查看: 2998  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？ 已有9人参与

我做菌落PCR，可是每次都P不出来。是因为革兰氏阳性菌菌壁较厚导致的菌体不能裂解吗？所以体系中模板量不足？
我用1%的TRITON- X100裂解后，先对裂解上清跑了一下电泳，结果是菌体能成功裂解，但是基因组DNA不能在胶里泳动，电泳40分钟后大部分DNA都还是在点样孔里。甚至有部分向阴极泳动。
这样的模板能直接加入PCR体系扩增吗？会不会导致扩增产物也是不能在胶里泳动？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-14 20:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带刀猎人

新虫 (小有名气)
我想是不是因为triton-X100的粘度比较大导致点样孔里的DNA不能泳动，还有就是triton使DNA带了正电荷，因为在紫外灯下可以看到明显的后移条带。我是扩增16srDNA我们实验室以前都是用菌落PCR的，能扩增出来，可我就是扩不出来，郁闷！

老大，再给指教指教吧！
赞一下 回复此楼
3楼2010-10-15 10:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):辛苦猴哥了 2010-10-14 22:23:49
革兰氏阳性菌你还用菌液PCR？ 细胞都不知道杀死没

一般大肠杆菌用菌液PCR都很不稳定的

你想P的基因不会在基因组里吧？就算在质粒里也不一定能P出来 何况基因组。

你所描述的电泳根本就不对，如果基因组提出来了 肯定是会移动的 在点样孔里的不是核酸
赞一下(2人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2010-10-14 21:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议提质粒进行PCR，菌落PCR很不准的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-15 10:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hulqi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
电泳反着跑？插错电极没 ？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-10-15 11:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +6 冷笙123 2026-03-17 6/300 2026-03-19 15:14 by peike
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 求调剂 +3 Mqqqqqq 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:11 by peike
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭