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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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带刀猎人

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢? 已有9人参与

我做菌落PCR,可是每次都P不出来。是因为革兰氏阳性菌菌壁较厚导致的菌体不能裂解吗?所以体系中模板量不足?
我用1%的TRITON- X100裂解后,先对裂解上清跑了一下电泳,结果是菌体能成功裂解,但是基因组DNA不能在胶里泳动,电泳40分钟后大部分DNA都还是在点样孔里。甚至有部分向阴极泳动。
这样的模板能直接加入PCR体系扩增吗?会不会导致扩增产物也是不能在胶里泳动?
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带刀猎人

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我想是不是因为triton-X100的粘度比较大导致点样孔里的DNA不能泳动,还有就是triton使DNA带了正电荷,因为在紫外灯下可以看到明显的后移条带。我是扩增16srDNA我们实验室以前都是用菌落PCR的,能扩增出来,可我就是扩不出来,郁闷!

老大,再给指教指教吧!
3楼2010-10-15 10:42:17
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