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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？
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带刀猎人

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？ 已有9人参与

我做菌落PCR，可是每次都P不出来。是因为革兰氏阳性菌菌壁较厚导致的菌体不能裂解吗？所以体系中模板量不足？
我用1%的TRITON- X100裂解后，先对裂解上清跑了一下电泳，结果是菌体能成功裂解，但是基因组DNA不能在胶里泳动，电泳40分钟后大部分DNA都还是在点样孔里。甚至有部分向阴极泳动。
这样的模板能直接加入PCR体系扩增吗？会不会导致扩增产物也是不能在胶里泳动？
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1楼 2010-10-14 20:02:21
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带刀猎人

新虫 (小有名气)
我想是不是因为triton-X100的粘度比较大导致点样孔里的DNA不能泳动，还有就是triton使DNA带了正电荷，因为在紫外灯下可以看到明显的后移条带。我是扩增16srDNA我们实验室以前都是用菌落PCR的，能扩增出来，可我就是扩不出来，郁闷！

老大，再给指教指教吧！
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3楼2010-10-15 10:42:17
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