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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR第一次扩出来第二次扩不出来
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er66668888

铜虫 (初入文坛)

[求助] PCR第一次扩出来第二次扩不出来 已有3人参与

我土壤DNA样品第一次扩出来了 然后第二次再去扩几次都扩不出来了 把之前扩出来的用来做阳性对照 条带很亮说明体系应该没问题 我想问问这种情况应该怎么去修正啊
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1楼 2014-03-30 17:31:43
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-30 20:57:20
er66668888: 金币+5 2014-05-20 10:52:26
你要确保模板是不是原先你用的那一个，再一个你重新用新的引物再重新扩一下试试。
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hehe
2楼2014-03-30 19:41:06
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er66668888

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-30 19:41:06
你要确保模板是不是原先你用的那一个，再一个你重新用新的引物再重新扩一下试试。

模板是一样的 我那个阳性对照是用成功扩出来的产物为模板做的很亮 引物应该没问题吧
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3楼2014-03-30 20:04:03
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er66668888

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-30 19:41:06
你要确保模板是不是原先你用的那一个，再一个你重新用新的引物再重新扩一下试试。

是一样的 引物应该没问题把 我用扩出来的那次的产物做的阳性对照很亮啊 就是原始的模板后来再也扩不出来了
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4楼2014-03-30 20:05:16
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muji9908

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:21:59
最有可能的是模板降级，我也有过这种情况。第一天的条带特别亮，第二天再扩就TM没了！不过最后不了了之了。祝好运
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5楼2014-03-31 10:42:03
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er66668888

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by muji9908 at 2014-03-31 10:42:03
最有可能的是模板降级，我也有过这种情况。第一天的条带特别亮，第二天再扩就TM没了！不过最后不了了之了。祝好运

酶加倍之后扩出来了
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6楼2014-04-04 20:58:45
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by er66668888 at 2014-04-04 20:58:45
酶加倍之后扩出来了...

我也是前两天能P出来，等菌再长大点，再重复就什么也P不出来了，找不出原因啊，难道菌长大了模板就降级了？这又是为什么
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7楼2014-04-29 10:21:32
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by muji9908 at 2014-03-31 10:42:03
最有可能的是模板降级，我也有过这种情况。第一天的条带特别亮，第二天再扩就TM没了！不过最后不了了之了。祝好运

模板为什么会降级啊，我用活化出来的小菌落P能P出来，等菌落长大后再在相同的条件下P 就什么也P不出来了。不知道什么原因
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8楼2014-04-29 11:27:06
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