应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来
61/1返回列表
查看: 3189  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] 模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来 已有1人参与

如题，我的两个基因GC含量74%，75%左右，75%的扩出来了，但是74%这个怎么弄也扩不出来，用的TAKARA的primestar HS with GC buffer。 二级结构预测用的RNA structure 。
模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来
图片1.png

[ Last edited by fanwq258 on 2014-3-7 at 10:04 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
1楼 2014-03-07 09:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-07 13:38:51
可能是引物设计的不是很好，在退火温度条件下预测一些你的目的片段的二级结构，设计引物时尽量避开这些二级结构。另外，我用sangon的高GC的Mix扩增出GC%为78%的片段，如果引物设计没有问题，不妨换一下产品试试
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2014-03-07 11:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)
加DMSO和甘油试试！
赞一下(3人) 回复此楼
理想很丰满，现实很骨感
3楼2014-03-09 17:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩，把退火温度调到60度，你在试试，有时候加一些DMSO,Mg离子，效果也是不错的
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-11 15:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小尾巴亚杰 at 2014-03-11 15:51:56
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩，把退火温度调到60度，你在试试，有时候加一些DMSO,Mg离子，效果也是不错的

你是说三步法吗？
赞一下 回复此楼
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
5楼2014-03-11 22:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fanwq258 at 2014-03-11 22:27:29
你是说三步法吗？...

是的
回复此楼
6楼2014-03-12 10:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanwq258 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 8/400 2026-08-04 13:15 by jzdxtiUmJ6PL
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 11/550 2026-08-04 12:58 by jzdxtiUmJ6PL
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 11:31 by MWRYsWbJw4DE
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭