应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来
61/1返回列表
查看: 3013  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] 模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来 已有1人参与

如题，我的两个基因GC含量74%，75%左右，75%的扩出来了，但是74%这个怎么弄也扩不出来，用的TAKARA的primestar HS with GC buffer。 二级结构预测用的RNA structure 。
模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来
图片1.png

[ Last edited by fanwq258 on 2014-3-7 at 10:04 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
1楼 2014-03-07 09:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-07 13:38:51
可能是引物设计的不是很好，在退火温度条件下预测一些你的目的片段的二级结构，设计引物时尽量避开这些二级结构。另外，我用sangon的高GC的Mix扩增出GC%为78%的片段，如果引物设计没有问题，不妨换一下产品试试
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2014-03-07 11:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)
加DMSO和甘油试试！
赞一下(3人) 回复此楼
理想很丰满，现实很骨感
3楼2014-03-09 17:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩，把退火温度调到60度，你在试试，有时候加一些DMSO,Mg离子，效果也是不错的
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-11 15:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小尾巴亚杰 at 2014-03-11 15:51:56
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩，把退火温度调到60度，你在试试，有时候加一些DMSO,Mg离子，效果也是不错的

你是说三步法吗？
赞一下 回复此楼
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
5楼2014-03-11 22:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fanwq258 at 2014-03-11 22:27:29
你是说三步法吗？...

是的
回复此楼
6楼2014-03-12 10:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanwq258 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +3 JasonYuiui 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:57 by 无际的草原
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +3 Liwangman 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:16 by JourneyLucky
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿郑大070303，338分，求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭