应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增融合基因
221/3返回列表123下一页
查看: 2398  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

histoday

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增融合基因

新手：一个新的融合基因，想把它的全长扩出来，大约2000多kb,已经试过很多次，都没有结果。想听听大家的意见。比如用什么酶比较好？我用过普通taq酶，La taq酶，platinum，也重新设计过多次引物，但还是不行，想请教一下大家，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-07 16:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2k 就用普通taq酶就可以
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-07 17:09:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

histoday

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-07 17:09:26
2k 就用普通taq酶就可以

用过了，没有扩出来
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-07 17:40:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

野草倚南墙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-11 13:37:36
楼主给的信息很少，包括基因分析，gc含量也没说，没扩出来的图是什么样的也没有，高gc要把退火温度调高一些，如果平均gc在70%以上，建议你变性时间延长，退火温度用68度试一试。还可以在预变性结束后再加酶，确保酶不会应为长时间高温而变性。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-07 22:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kwkw

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用TOUVHDOWN ，退火从65度到54度，延伸时间2.5分钟
赞一下 回复此楼
再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
5楼2012-07-08 10:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

histoday

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 野草倚南墙 at 2012-07-07 22:04:11
楼主给的信息很少，包括基因分析，gc含量也没说，没扩出来的图是什么样的也没有，高gc要把退火温度调高一些，如果平均gc在70%以上，建议你变性时间延长，退火温度用68度试一试。还可以在预变性结束后再加酶，确保酶 ...

GC含量不高，电泳直接没条带，我用地梯度PCR，设了五个退火温度，我怀疑是不是里面有什么复杂结构
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-08 12:43:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

histoday

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by kwkw at 2012-07-08 10:37:03
用TOUVHDOWN ，退火从65度到54度，延伸时间2.5分钟

因为我的模板量不多，我先配50ul体系，然后平均分成10ul体系跑PCR，不知道这样有没有影响？？
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-08 16:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加大循环数
先上40.
P出来后，再优化条件
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-09 00:59:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 很热心的虫虫哦 2012-07-11 13:38:00
有几个可能的原因：
1.酶的问题，采用延伸能力比较强的酶
2.引物问题，看看引物之间以及本身的配对碱基情况
3.模板问题，GC含量高或者产生内部形成复杂的二级结构，考虑使用GC buffer以及扩增体系中加入甘油等物质
4.退火温度过低或者循环数偏少，提高退火温度以及加大循环数
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-09 08:41:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)
2000多kb怎么扩啊？
赞一下 回复此楼
伟大航线....
10楼2012-07-09 08:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 histoday 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭