【答案】应助回帖

11楼2012-07-09 10:18:16

kwkw

木虫 (著名写手)

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7楼: Originally posted by histoday at 2012-07-08 16:01:48
因为我的模板量不多，我先配50ul体系，然后平均分成10ul体系跑PCR，不知道这样有没有影响？？...

理论上没有影响，不过体系这么小，中间来点蒸发就没什么了，为什么不配20ul试一下，另外你用的模板量是不是太少，如果TOUVHDOWN都跑不出来，应该是你的引物跟你的模板不能匹配，可能要重新设计引物。

再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！

12楼2012-07-09 13:53:46

joan198108

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11楼: Originally posted by histoday at 2012-07-09 10:18:16
您说的延伸能力比较强的酶是什么酶？内部是否形成复杂二级结构我怎么能看出来？...

延伸能力强的酶的话，就比如TaKaRa的LA Taq延伸能力就优于普通Taq酶。二级结构可以通过软件预测一下，你可以到网上搜搜。

13楼2012-07-09 14:36:00

我是小纯洁

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-11 13:38:22

建议巢式PCR，楼上说的touchdown，真心没有巢式来的实在。我也是有几个基因移植扩不出来，试过各种温度，各种PCR方法，最后还是巢式PCR管用。基本一次成功。具体方法去网上搜搜吧，原理很简单。

14楼2012-07-09 16:03:23

我是小纯洁

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【答案】应助回帖

http://www.idtdna.com/analyzer/A ... alyzer/Default.aspx，预测二级结构的网站，问问你们同学或者老板怎么用。我在网上给你说不清楚。

15楼2012-07-09 16:04:47

histoday

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14楼: Originally posted by 我是小纯洁 at 2012-07-09 16:03:23
建议巢式PCR，楼上说的touchdown，真心没有巢式来的实在。我也是有几个基因移植扩不出来，试过各种温度，各种PCR方法，最后还是巢式PCR管用。基本一次成功。具体方法去网上搜搜吧，原理很简单。

您做巢式时用的什么酶呢？您能不能把您以前做的产物序列和引物发给我呢？我想看看具体两个引物在什么位置。

16楼2012-07-10 15:43:07