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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增融合基因
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histoday

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增融合基因

新手：一个新的融合基因，想把它的全长扩出来，大约2000多kb,已经试过很多次，都没有结果。想听听大家的意见。比如用什么酶比较好？我用过普通taq酶，La taq酶，platinum，也重新设计过多次引物，但还是不行，想请教一下大家，谢谢！
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1楼 2012-07-07 16:23:43
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by histoday at 2012-07-09 10:18:16
您说的延伸能力比较强的酶是什么酶？内部是否形成复杂二级结构我怎么能看出来？...

延伸能力强的酶的话，就比如TaKaRa的LA Taq延伸能力就优于普通Taq酶。二级结构可以通过软件预测一下，你可以到网上搜搜。
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13楼2012-07-09 14:36:00
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beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2k 就用普通taq酶就可以
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2楼2012-07-07 17:09:26
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histoday

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-07 17:09:26
2k 就用普通taq酶就可以

用过了，没有扩出来
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3楼2012-07-07 17:40:57
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野草倚南墙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-11 13:37:36
楼主给的信息很少，包括基因分析，gc含量也没说，没扩出来的图是什么样的也没有，高gc要把退火温度调高一些，如果平均gc在70%以上，建议你变性时间延长，退火温度用68度试一试。还可以在预变性结束后再加酶，确保酶不会应为长时间高温而变性。
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4楼2012-07-07 22:04:11
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