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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠PCR应该怎么做？
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wlsky24

新虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR应该怎么做？

各位大侠，问下重叠PCR该怎么做？有没有具体的操作流程呢？
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1楼 2011-10-19 16:12:54
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
重叠？是做片段连接PCR吗？
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一直向前！
2楼2011-10-19 16:19:18
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wlsky24(金币+1): 具体PCR的时候该怎么做呢？先不加引物PCR几个循环，然后再加引物继续循环 2011-10-19 16:56:18
A B 两段基因  设计引物的时候让A的3端跟B的5端有部分重合，重合部分最好在15个碱基以上
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hold住
3楼2011-10-19 16:26:01
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wlsky24

新虫 (正式写手)
具体PCR的时候该怎么做呢？
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4楼2011-10-19 16:55:00
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-10-19 18:31:06
西瓜(金币+3): Good！ 2011-10-19 18:31:07
西瓜(金币-3): 重复评贴了，扣掉多给的金币。非常抱歉！ 2011-10-19 19:06:07
具体可以参照文献上的步骤   查找SOE PCR   

先把两段基因P成延伸的两段基因  再互为引物彼此延伸10个循环  再加入两端的引物  P出融合基因来
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hold住
5楼2011-10-19 17:27:59
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wlsky24

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangxn2010 at 2011-10-19 16:19:18:
重叠？是做片段连接PCR吗？

恩，连接个抗性基因
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6楼2011-10-19 20:11:35
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wlsky24

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-19 17:27:59:
具体可以参照文献上的步骤   查找SOE PCR   

先把两段基因P成延伸的两段基因  再互为引物彼此延伸10个循环  再加入两端的引物  P出融合基因来

我p了下，结果不太好
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7楼2011-10-19 20:12:20
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
上图看看呀。我们做重叠PCR都分两步，第一步是两个片段的融合，一般很多杂带，拖尾很严重，但是只要有一点微弱的目的片段就够了，因为我们还有第二步，就是用引物再把重叠好的片段进行特异扩增，这步就是普通的PCR了。
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wlsky24
8楼2011-10-19 20:55:31
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wlsky24

新虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-19 20:55:31:
上图看看呀。我们做重叠PCR都分两步，第一步是两个片段的融合，一般很多杂带，拖尾很严重，但是只要有一点微弱的目的片段就够了，因为我们还有第二步，就是用引物再把重叠好的片段进行特异扩增，这步就是普通的PC ...

谢啦，我的P出来了
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9楼2011-10-19 23:05:31
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hackett

银虫 (小有名气)
3个片段的重叠pcr可以一步到位么？
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Dreamer
10楼2012-04-15 15:52:25
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