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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱,弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变,第一轮pcr两个条带都很好,第二轮连接两段,同样的条件,目的带很弱,且整个泳道弥散,我照着目的条带切下回收,想做二次pcr增大产物量,可是怎么也p不出来,模板的量从1/500到5倍都试过了,不行,不知道什么原因。酶和引物都没问题
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
体系变一变,每一次做的时候把条件都换一换~
祝好运!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-07-25 17:53:46
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tongyanna

金虫 (正式写手)

祝你好运啊
自己的路,自己快乐的走
3楼2010-07-25 18:21:10
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-07-25 19:59:28
第二次PCR,条带不清晰,要看看是不是你的目的了,看看是不是哪里出了问题,还有你第一次是不是真的P出来了,这些都考虑一下……上面说的对,把能换新的的,都换新的再试试……
4楼2010-07-25 18:32:46
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sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计你就是没连上,看看引物是不是设计反了?或者重合的bp数太少了
5楼2010-07-25 19:43:05
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

谢谢各位虫友,我用原来的模板做过对照,p出来的很好
6楼2010-07-25 21:33:50
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rheliang

禁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

7楼2011-05-30 15:36:17
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
目的条带淡要不试着增加下循环数,最近也在PCR,很纠结!!!
PCR是魔鬼
8楼2011-05-30 15:39:01
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ashelychan

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-07 18:13:25
我最近也在重叠PCR,不过连第一轮都没P出来。你第二轮P的时候注意退火温度一定不要超过重叠部分的融解温度,要不然重叠部分没办法重叠,这样你也很难扩出来。
我奋斗,所以我精彩;我快乐,所以我精彩;我自信,所以我精彩
9楼2011-10-07 16:06:53
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

★ ★
wanhscn(金币+2): Good! 2011-10-08 13:47:17
去年的帖子,现在做个完结。
那时候再怎么改条件,以重叠延伸后的产物做模板都P不出来,但实验得往下走,就直接进行了酶切,和载体进行连接,克隆,还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少,看来是多余的。
至于重叠延伸PCR的细节经验,我会另辟帖子进行介绍!
10楼2011-10-08 12:12:56
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