24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2728  |  回复: 12

hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱,弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变,第一轮pcr两个条带都很好,第二轮连接两段,同样的条件,目的带很弱,且整个泳道弥散,我照着目的条带切下回收,想做二次pcr增大产物量,可是怎么也p不出来,模板的量从1/500到5倍都试过了,不行,不知道什么原因。酶和引物都没问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
体系变一变,每一次做的时候把条件都换一换~
祝好运!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-07-25 17:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyanna

金虫 (正式写手)

祝你好运啊
自己的路,自己快乐的走
3楼2010-07-25 18:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-07-25 19:59:28
第二次PCR,条带不清晰,要看看是不是你的目的了,看看是不是哪里出了问题,还有你第一次是不是真的P出来了,这些都考虑一下……上面说的对,把能换新的的,都换新的再试试……
4楼2010-07-25 18:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计你就是没连上,看看引物是不是设计反了?或者重合的bp数太少了
5楼2010-07-25 19:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)

谢谢各位虫友,我用原来的模板做过对照,p出来的很好
6楼2010-07-25 21:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rheliang

禁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

7楼2011-05-30 15:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
目的条带淡要不试着增加下循环数,最近也在PCR,很纠结!!!
PCR是魔鬼
8楼2011-05-30 15:39:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashelychan

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-07 18:13:25
我最近也在重叠PCR,不过连第一轮都没P出来。你第二轮P的时候注意退火温度一定不要超过重叠部分的融解温度,要不然重叠部分没办法重叠,这样你也很难扩出来。
我奋斗,所以我精彩;我快乐,所以我精彩;我自信,所以我精彩
9楼2011-10-07 16:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)

★ ★
wanhscn(金币+2): Good! 2011-10-08 13:47:17
去年的帖子,现在做个完结。
那时候再怎么改条件,以重叠延伸后的产物做模板都P不出来,但实验得往下走,就直接进行了酶切,和载体进行连接,克隆,还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少,看来是多余的。
至于重叠延伸PCR的细节经验,我会另辟帖子进行介绍!
10楼2011-10-08 12:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdxudeduo 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +3 刺痛jk 2026-04-06 4/200 2026-04-06 01:34 by 迦子楠木香
[考研] 材料334求调剂 +18 Eecho# 2026-04-03 18/900 2026-04-06 00:56 by fmesaito
[考研] 308求调剂 +11 倘若起风了呢 2026-04-05 11/550 2026-04-05 23:21 by 来看流星雨10
[考研] 材料工程302分求调剂 +9 zyx上岸! 2026-04-04 9/450 2026-04-05 22:08 by 醉翁wl
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 复试调剂 +3 asdasdassda 2026-04-05 3/150 2026-04-05 17:26 by zhousanduo
[考研] 085600,321分求调剂 +10 大馋小子 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:25 by 544594351
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-02 9/450 2026-04-04 22:07 by hemengdong
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 求调剂 +3 wos666 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:16 by gswylq
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 348求调剂 +6 吴彦祖24k 2026-04-02 6/300 2026-04-02 14:07 by 给你你注意休息
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
信息提示
请填处理意见