应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2726  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变，第一轮pcr两个条带都很好，第二轮连接两段，同样的条件，目的带很弱，且整个泳道弥散，我照着目的条带切下回收，想做二次pcr增大产物量，可是怎么也p不出来，模板的量从1/500到5倍都试过了，不行，不知道什么原因。酶和引物都没问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-25 16:12:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
体系变一变，每一次做的时候把条件都换一换~
祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-07-25 17:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyanna

金虫 (正式写手)
祝你好运啊
回复此楼
自己的路，自己快乐的走
3楼2010-07-25 18:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-07-25 19:59:28
第二次PCR，条带不清晰，要看看是不是你的目的了，看看是不是哪里出了问题，还有你第一次是不是真的P出来了，这些都考虑一下……上面说的对，把能换新的的，都换新的再试试……
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-25 18:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计你就是没连上，看看引物是不是设计反了？或者重合的bp数太少了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-25 19:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)
谢谢各位虫友，我用原来的模板做过对照，p出来的很好
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-25 21:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rheliang

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2011-05-30 15:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
目的条带淡要不试着增加下循环数，最近也在PCR，很纠结！！！
PCR是魔鬼
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-30 15:39:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashelychan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-07 18:13:25
我最近也在重叠PCR，不过连第一轮都没P出来。你第二轮P的时候注意退火温度一定不要超过重叠部分的融解温度，要不然重叠部分没办法重叠，这样你也很难扩出来。
赞一下(2人) 回复此楼
我奋斗，所以我精彩；我快乐，所以我精彩；我自信，所以我精彩
9楼2011-10-07 16:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): Good！ 2011-10-08 13:47:17
去年的帖子，现在做个完结。
那时候再怎么改条件，以重叠延伸后的产物做模板都P不出来，但实验得往下走，就直接进行了酶切，和载体进行连接，克隆，还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少，看来是多余的。
至于重叠延伸PCR的细节经验，我会另辟帖子进行介绍！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-10-08 12:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdxudeduo 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +9 zyx上岸！ 2026-04-05 9/450 2026-04-05 19:05 by 蓝云思雨
[考研] 298求调剂 +3 manman511 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:09 by kk112233
[考研] 0703化学调剂325分 +9 15771691647 2026-04-04 9/450 2026-04-05 11:39 by 猪会飞
[考研] 341求调剂 +3 学无止境，冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 工科 267求调剂 +5 wanwan00 2026-04-02 7/350 2026-04-03 14:14 by zhangdingwa
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭