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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变，第一轮pcr两个条带都很好，第二轮连接两段，同样的条件，目的带很弱，且整个泳道弥散，我照着目的条带切下回收，想做二次pcr增大产物量，可是怎么也p不出来，模板的量从1/500到5倍都试过了，不行，不知道什么原因。酶和引物都没问题
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1楼 2010-07-25 16:12:20
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ashelychan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-07 18:13:25
我最近也在重叠PCR，不过连第一轮都没P出来。你第二轮P的时候注意退火温度一定不要超过重叠部分的融解温度，要不然重叠部分没办法重叠，这样你也很难扩出来。
赞一下(2人) 回复此楼
我奋斗，所以我精彩；我快乐，所以我精彩；我自信，所以我精彩
9楼2011-10-07 16:06:53
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