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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变，第一轮pcr两个条带都很好，第二轮连接两段，同样的条件，目的带很弱，且整个泳道弥散，我照着目的条带切下回收，想做二次pcr增大产物量，可是怎么也p不出来，模板的量从1/500到5倍都试过了，不行，不知道什么原因。酶和引物都没问题
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1楼 2010-07-25 16:12:20
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)
谢谢各位虫友，我用原来的模板做过对照，p出来的很好
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6楼2010-07-25 21:33:50
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): Good！ 2011-10-08 13:47:17
去年的帖子，现在做个完结。
那时候再怎么改条件，以重叠延伸后的产物做模板都P不出来，但实验得往下走，就直接进行了酶切，和载体进行连接，克隆，还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少，看来是多余的。
至于重叠延伸PCR的细节经验，我会另辟帖子进行介绍！
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10楼2011-10-08 12:12:56
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