应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
131/2返回列表12下一页
查看: 2703  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变，第一轮pcr两个条带都很好，第二轮连接两段，同样的条件，目的带很弱，且整个泳道弥散，我照着目的条带切下回收，想做二次pcr增大产物量，可是怎么也p不出来，模板的量从1/500到5倍都试过了，不行，不知道什么原因。酶和引物都没问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-25 16:12:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
体系变一变，每一次做的时候把条件都换一换~
祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-07-25 17:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyanna

金虫 (正式写手)
祝你好运啊
回复此楼
自己的路，自己快乐的走
3楼2010-07-25 18:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-07-25 19:59:28
第二次PCR，条带不清晰，要看看是不是你的目的了，看看是不是哪里出了问题，还有你第一次是不是真的P出来了，这些都考虑一下……上面说的对，把能换新的的，都换新的再试试……
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-25 18:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计你就是没连上，看看引物是不是设计反了？或者重合的bp数太少了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-25 19:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)
谢谢各位虫友，我用原来的模板做过对照，p出来的很好
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-25 21:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rheliang

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2011-05-30 15:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
目的条带淡要不试着增加下循环数，最近也在PCR，很纠结！！！
PCR是魔鬼
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-30 15:39:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashelychan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-07 18:13:25
我最近也在重叠PCR，不过连第一轮都没P出来。你第二轮P的时候注意退火温度一定不要超过重叠部分的融解温度，要不然重叠部分没办法重叠，这样你也很难扩出来。
赞一下(2人) 回复此楼
我奋斗，所以我精彩；我快乐，所以我精彩；我自信，所以我精彩
9楼2011-10-07 16:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdxudeduo

银虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): Good！ 2011-10-08 13:47:17
去年的帖子，现在做个完结。
那时候再怎么改条件，以重叠延伸后的产物做模板都P不出来，但实验得往下走，就直接进行了酶切，和载体进行连接，克隆，还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少，看来是多余的。
至于重叠延伸PCR的细节经验，我会另辟帖子进行介绍！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-10-08 12:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdxudeduo 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +14 梁梁校校 2026-03-19 16/800 2026-03-26 18:13 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 284求调剂 +7 junqihahaha 2026-03-26 7/350 2026-03-26 16:51 by allen-yin
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +8 小蜡新笔 2026-03-26 8/400 2026-03-26 16:18 by dick_runner
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭