24小时热门版块排行榜    

查看: 2896  |  回复: 6

qingshi2

银虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带弱,而dimer很亮,怎么调整呢?

如题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zz217

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 谢谢 2011-05-01 23:04:39
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:20
稍微降一点退火温度试试
dimer应该不是问题
2楼2011-05-01 21:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuelian11986

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wolfebst(金币+3): 鼓励新虫多多交流 2011-05-03 12:58:37
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:31
除了退火温度以外,dimer的量可以适当减少,尽量全程冰上完成
3楼2011-05-03 10:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

调退火温度,有条件跑个温度梯度PCR;适当加大模板量;调整Mg离子浓度,降一点试试;把要加的上下游引物预混,沸水浴5 min,迅速冰浴冷却,加入PCR体系中再做也是一法;最后,王道是重新设计合成几对引物试试。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2011-05-03 12:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ldy-529

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:52
首先考虑一下降低一下你PCR的退火温度,然后调整一下你模板和引物的比例,实在不行可以考虑重新设计引物。
5楼2011-05-03 13:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingshi2

银虫 (小有名气)

我 根据一篇文献, 先在低温下5个循环,然后再提高退火温度30个循环,这样出来条带比较亮, 引物的特意性不是很好,有两条较量的带,需要切胶回收
6楼2011-05-10 09:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)

新手,我现在也遇到这样的情况,条带很弱,有引物二聚体体,做了个降落pcr,想把最后的一个循环提高一下退火温度
7楼2016-03-13 10:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qingshi2 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见