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qingshi2

银虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带弱,而dimer很亮,怎么调整呢?

如题
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zz217

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 谢谢 2011-05-01 23:04:39
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:20
稍微降一点退火温度试试
dimer应该不是问题
2楼2011-05-01 21:12:50
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xuelian11986

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wolfebst(金币+3): 鼓励新虫多多交流 2011-05-03 12:58:37
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:31
除了退火温度以外,dimer的量可以适当减少,尽量全程冰上完成
3楼2011-05-03 10:51:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

调退火温度,有条件跑个温度梯度PCR;适当加大模板量;调整Mg离子浓度,降一点试试;把要加的上下游引物预混,沸水浴5 min,迅速冰浴冷却,加入PCR体系中再做也是一法;最后,王道是重新设计合成几对引物试试。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2011-05-03 12:49:34
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ldy-529

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:52
首先考虑一下降低一下你PCR的退火温度,然后调整一下你模板和引物的比例,实在不行可以考虑重新设计引物。
5楼2011-05-03 13:03:44
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qingshi2

银虫 (小有名气)

我 根据一篇文献, 先在低温下5个循环,然后再提高退火温度30个循环,这样出来条带比较亮, 引物的特意性不是很好,有两条较量的带,需要切胶回收
6楼2011-05-10 09:32:01
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俊锋

新虫 (初入文坛)

新手,我现在也遇到这样的情况,条带很弱,有引物二聚体体,做了个降落pcr,想把最后的一个循环提高一下退火温度
7楼2016-03-13 10:24:30
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