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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » pcr目的条带弱，而dimer很亮，怎么调整呢？
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qingshi2

银虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带弱，而dimer很亮，怎么调整呢？

如题
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1楼 2011-05-01 20:01:01
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zz217

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wolfebst(金币+1): 谢谢 2011-05-01 23:04:39
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:20
稍微降一点退火温度试试
dimer应该不是问题
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2楼2011-05-01 21:12:50
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xuelian11986

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wolfebst(金币+3): 鼓励新虫多多交流 2011-05-03 12:58:37
qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:31
除了退火温度以外，dimer的量可以适当减少，尽量全程冰上完成
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3楼2011-05-03 10:51:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

调退火温度，有条件跑个温度梯度PCR；适当加大模板量；调整Mg离子浓度，降一点试试；把要加的上下游引物预混，沸水浴5 min，迅速冰浴冷却，加入PCR体系中再做也是一法；最后，王道是重新设计合成几对引物试试。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2011-05-03 12:49:34
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ldy-529

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qingshi2(金币+1): 2011-05-10 09:33:52
首先考虑一下降低一下你PCR的退火温度，然后调整一下你模板和引物的比例，实在不行可以考虑重新设计引物。
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5楼2011-05-03 13:03:44
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qingshi2

银虫 (小有名气)
我 根据一篇文献， 先在低温下5个循环，然后再提高退火温度30个循环，这样出来条带比较亮， 引物的特意性不是很好，有两条较量的带，需要切胶回收
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6楼2011-05-10 09:32:01
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俊锋

新虫 (初入文坛)
新手，我现在也遇到这样的情况，条带很弱，有引物二聚体体，做了个降落pcr，想把最后的一个循环提高一下退火温度
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7楼2016-03-13 10:24:30
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