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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠延伸PCR设计引物
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hzy123321

木虫 (初入文坛)

[求助] 重叠延伸PCR设计引物

请问设计的每一个引物都需要相同的Tm值吗？
另外，我需要把两个基因连接在一起，但是基因片段很短，只有36bp，设计的引物相互重叠的长度是多少比较合适？
在设计引物的时候还要注意哪些才能保证PCR成功呢？
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1楼 2011-10-09 20:57:39
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-09 23:05:58
wanhscn: 待楼主反馈后，将会授予专家指数！ 2011-10-10 09:35:09
hzy123321(金币+20): 我知道怎么做了 分给你吧 谢谢 2011-10-12 10:30:22
wanhscn(金币+2, MolEPI+1): 根据楼主回复！专家指数补上！ 2011-11-26 20:58:24
1.Tm值相近即可
2.36bp的基因我想知道是什么基因？12个氨基酸的十二肽？有的引物都比他长，为什么要扩增呢？直接DNA合成就行了，就当合成引物了，完了你再连接起来就是了……
设计引物的时候需要注意的也就是茎环结构什么的不要太多，Tm值相近之类的，你用primer5.0他们会有打分的，资源帖里面有很详尽的使用方法……
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hzy123321
显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-09 21:05:03
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

或者你可以这个36bp的片段连在别的载体上，再挂个别什么基因的再切下来链接
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-09 21:35:04
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hzy123321

木虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-09 21:05:03:
1.Tm值相近即可
2.36bp的基因我想知道是什么基因？12个氨基酸的十二肽？有的引物都比他长，为什么要扩增呢？直接DNA合成就行了，就当合成引物了，完了你再连接起来就是了……
设计引物的时候需要注意的也就是茎 ...

谢谢，是十二肽。如果要把这个多肽以多拷贝的形式克隆到表达载体，进行重叠延伸PCR时，设计的引物就很容易形成cross dimer。怎样才能避免呢？
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4楼2011-10-10 19:53:59
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