24小时热门版块排行榜    

查看: 2097  |  回复: 3
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

hzy123321

木虫 (初入文坛)

[求助] 重叠延伸PCR设计引物

请问设计的每一个引物都需要相同的Tm值吗?
另外,我需要把两个基因连接在一起,但是基因片段很短,只有36bp,设计的引物相互重叠的长度是多少比较合适?
在设计引物的时候还要注意哪些才能保证PCR成功呢?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good! 2011-10-09 23:05:58
wanhscn: 待楼主反馈后,将会授予专家指数! 2011-10-10 09:35:09
hzy123321(金币+20): 我知道怎么做了 分给你吧 谢谢 2011-10-12 10:30:22
wanhscn(金币+2, MolEPI+1): 根据楼主回复!专家指数补上! 2011-11-26 20:58:24
1.Tm值相近即可
2.36bp的基因我想知道是什么基因?12个氨基酸的十二肽?有的引物都比他长,为什么要扩增呢?直接DNA合成就行了,就当合成引物了,完了你再连接起来就是了……
设计引物的时候需要注意的也就是茎环结构什么的不要太多,Tm值相近之类的,你用primer5.0他们会有打分的,资源帖里面有很详尽的使用方法……

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-10-09 21:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

或者你可以这个36bp的片段连在别的载体上,再挂个别什么基因的再切下来链接
显微镜下的世界很精彩!
3楼2011-10-09 21:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzy123321

木虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-09 21:05:03:
1.Tm值相近即可
2.36bp的基因我想知道是什么基因?12个氨基酸的十二肽?有的引物都比他长,为什么要扩增呢?直接DNA合成就行了,就当合成引物了,完了你再连接起来就是了……
设计引物的时候需要注意的也就是茎 ...

谢谢,是十二肽。如果要把这个多肽以多拷贝的形式克隆到表达载体,进行重叠延伸PCR时,设计的引物就很容易形成cross dimer。怎样才能避免呢?
4楼2011-10-10 19:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hzy123321 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[博后之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意! +8 zju2000 2026-09-26 9/450 2026-09-29 13:47 by ahsoarli
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
请填处理意见