[求助] 重叠PCR应该怎么做？

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1楼2011-10-19 16:12:54

zhangxn2010

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重叠？是做片段连接PCR吗？

一直向前！

2楼2011-10-19 16:19:18

zc10052157

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【答案】应助回帖

wlsky24(金币+1): 具体PCR的时候该怎么做呢？先不加引物PCR几个循环，然后再加引物继续循环 2011-10-19 16:56:18

A B 两段基因设计引物的时候让A的3端跟B的5端有部分重合，重合部分最好在15个碱基以上

hold住

3楼2011-10-19 16:26:01

wlsky24

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具体PCR的时候该怎么做呢？

4楼2011-10-19 16:55:00

zc10052157

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★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-10-19 18:31:06
西瓜(金币+3): Good！ 2011-10-19 18:31:07
西瓜(金币-3): 重复评贴了，扣掉多给的金币。非常抱歉！ 2011-10-19 19:06:07

具体可以参照文献上的步骤查找SOE PCR

先把两段基因P成延伸的两段基因再互为引物彼此延伸10个循环再加入两端的引物 P出融合基因来

赞一下(3人)

hold住

5楼2011-10-19 17:27:59

wlsky24

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhangxn2010 at 2011-10-19 16:19:18:
重叠？是做片段连接PCR吗？

恩，连接个抗性基因

6楼2011-10-19 20:11:35

wlsky24

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引用回帖:

5楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-19 17:27:59:
具体可以参照文献上的步骤查找SOE PCR

先把两段基因P成延伸的两段基因再互为引物彼此延伸10个循环再加入两端的引物 P出融合基因来

我p了下，结果不太好

7楼2011-10-19 20:12:20

西瓜

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上图看看呀。我们做重叠PCR都分两步，第一步是两个片段的融合，一般很多杂带，拖尾很严重，但是只要有一点微弱的目的片段就够了，因为我们还有第二步，就是用引物再把重叠好的片段进行特异扩增，这步就是普通的PCR了。

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wlsky24

8楼2011-10-19 20:55:31

wlsky24

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-19 20:55:31:
上图看看呀。我们做重叠PCR都分两步，第一步是两个片段的融合，一般很多杂带，拖尾很严重，但是只要有一点微弱的目的片段就够了，因为我们还有第二步，就是用引物再把重叠好的片段进行特异扩增，这步就是普通的PC ...

谢啦，我的P出来了

9楼2011-10-19 23:05:31

hackett

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3个片段的重叠pcr可以一步到位么？

Dreamer

10楼2012-04-15 15:52:25