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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何扩增GC含量较高的片段
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匿名

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1楼2013-08-22 15:36:05
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-23 17:59:39
楼主可以选择LA-TAQ，扩增片段长，GC BUFFER I 另卖，声明：俺可不是托啊，呵呵
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jiayoubashaonian
2楼2013-08-22 16:37:46
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匿名

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3楼2013-08-22 17:43:50
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:14
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-23 17:58:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by 死神之死 at 2013-08-22 17:43:50
谢谢，努力尝试中...

嗯.................
      文献中一般说是有加NaOH，或是延长变性等条件，不过照我看来，与其摸索条件不如直接换酶。
       正如楼上所说，TaKaRa的LA-Taq很好，不过我们一般直接上GC BufferII的，不过LA的保真烂的差不多就是Taq了（本来它也是Taq混合的），如果要追求保真TOYOBO的KOD-FX应该是个好选择。
       我也重申，偶不是托
       个人意见，如有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
4楼2013-08-23 11:13:39
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匿名

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5楼2013-08-23 16:09:19
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-23 17:59:20
我扩的片段GC含量高达80%的 就是用GC buffer I 外加2.5ul的DMSO (50ul体系) 完全没问题
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6楼2013-08-23 16:23:31
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加菲的树袋熊

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-08-23 16:28:37
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-23 17:59:29
当初批1300bp的片段，GC含量70%，就是用的GC buffer I，不过酶用的pfu~~
另外适当提高退火温度（可以先用低退火温度run 3、5个循环），减少形成发夹结构
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岂能尽如人意，但求无愧我心
8楼2013-08-23 16:31:01
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