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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wickhamhan(金币+3): 2011-07-20 21:28:20
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-07-21 11:52:00
这个未必完全是酶的原因,你要看突变位点在什么地方:
(1)如果在引物内的某一位点发生突变则基本上是又有引物本身的问题,尤其是引物的最后一个碱基是A的时候,他之后的一个碱基发生突变的几率较其他3中碱基要大的多
(2)片段序列中含特殊序列:高GC或连续的多个串联重复序列在PCR扩增片段时以及连到载体并在受体菌内扩增时容易发生突变
(3)酶的保真性,不过你的片段只有600多,现在常用的普通Taq酶扩增一般的片段不会出现那么多突变,所以主要由前两个因素引起
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-07-20 21:22:38
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匿名

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3楼2011-07-20 21:29:01
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wickhamhan(金币+3): 恩 十分感谢!~ 2011-07-20 21:37:44
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-07-21 11:52:16
引用回帖:
Originally posted by wickhamhan at 2011-07-20 21:29:01:
我的模板是高GC的~还是准备换酶试试呢

解决方法:
(1)先换高保真酶重新扩增片段
(2)如果突变位点离的很近的话可以同时设计引物对发生突变的位置进行修复
(3)如果条件允许多转几种感受态细胞,比如DH5a、Stable2或3、SURE
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-20 21:34:14
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 同意啊! 2011-07-21 11:52:28
wickhamhan(金币+1): 2011-12-11 00:13:07
产物长度不是很长,应该与酶的关系不大,一般的酶扩增1000多的都不会有太大问题,只是测序后有点突变,因素很多,要看突变位置了,静等高手赐教!
5楼2011-07-20 21:53:50
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