应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】【求助】有没有做过pfu和rTaq一起使用的
171/2返回列表12下一页
查看: 1660  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】【求助】有没有做过pfu和rTaq一起使用的 已有14人参与

最近在做PCR，目的基因大小为1kb。用rTaq扩增效果很好，但是发生突变，我最终的产物是用来表达，测定生物活性的所以要求没有突变。后来就买了promega的pfu但是不论怎么探索就是P不出来，500多元买的东西，眼见就没了，兄弟我急啊。所以打算退而求其次，将pfu和rTaq混合起来用，但是不知道以下内容：
1：二者的配比是多少？
2：两个混合到一起，用谁的buffer？
3：退火温度是迁就rTaq还是pfu？


谢谢大家～～～
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-06 16:27:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

蓝粉笔

铁虫 (初入文坛)
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-06 22:52:21
那种酶保真效果更好呢？我也在纠结这个问题，一个碱基错了就得重来了，很郁闷。或者有什么方法可以提高酶的保真性呢？是优化Mg还是dNTP或是温度？
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2010-05-06 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lingn

木虫 (正式写手)
★
humants(金币+1):谢谢参与
1：1混就好，用PFU的buffer，退火温度有区别吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-06 16:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
★
humants(金币+1):谢谢参与
呵呵，1/16或者20%都可以的，退不需要调整什么，就是延伸最好按照pfu的设置
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-06 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-06 22:52:28
我建议楼主买个宝生物的EX Taq，比普通rtaq保真性高很多，错配很少，又不像PFU条件那么苛刻，极容易扩增出来，价格也没那么贵。而且末端带“A”，可以直接连进载体，比PFU省劲多了
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-05-06 18:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)
谢谢大家的参与
回复此楼
6楼2010-05-06 18:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):试试下次 2010-05-06 22:53:16
pfu:taq 3:7
我们实验室就这么用的 效果还不错
赞一下(2人) 回复此楼
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
7楼2010-05-06 19:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jerryqpr at 2010-05-06 19:58:58:
pfu:taq 3:7
我们实验室就这么用的 效果还不错

请问你们用的是哪种buffer，是pfu的还是rTaq的？
赞一下 回复此楼
8楼2010-05-06 21:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公
我们用的是pfu的buffer
赞一下 回复此楼
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
9楼2010-05-09 09:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):正解 2010-06-14 13:16:02
buffer需要优化，按比例多个梯度
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2010-06-13 09:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 humants 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 272分材料子求调剂 +36 Loy0361 2026-04-10 47/2350 2026-04-12 02:25 by mfyue2000
[考研] 297求调剂 +15 ORCHID1 2026-04-10 16/800 2026-04-12 00:45 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +26 严西西戏 2026-04-06 33/1650 2026-04-11 23:01 by 314126402
[考研] 086003调剂求助 +21 苏弋万 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 20:25 by dongdian1
[考研] 366求调剂 +7 不知名的小卅 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:45 by PeggyPeng17
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +17 努力奋斗112 2026-04-06 20/1000 2026-04-11 00:31 by wangjihu
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 332，085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 材料工程调剂 +12 小刘同学吖吖 2026-04-06 13/650 2026-04-09 17:07 by luoyongfeng
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭