24小时热门版块排行榜    

查看: 1938  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】【求助】有没有做过pfu和rTaq一起使用的 已有14人参与

最近在做PCR,目的基因大小为1kb。用rTaq扩增效果很好,但是发生突变,我最终的产物是用来表达,测定生物活性的所以要求没有突变。后来就买了promega的pfu但是不论怎么探索就是P不出来,500多元买的东西,眼见就没了,兄弟我急啊。所以打算退而求其次,将pfu和rTaq混合起来用,但是不知道以下内容:
1:二者的配比是多少?
2:两个混合到一起,用谁的buffer?
3:退火温度是迁就rTaq还是pfu?


谢谢大家~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公

我们用的是pfu的buffer
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
9楼2010-05-09 09:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

lingn

木虫 (正式写手)


humants(金币+1):谢谢参与
1:1混就好,用PFU的buffer,退火温度有区别吗?
2楼2010-05-06 16:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)


humants(金币+1):谢谢参与
呵呵,1/16或者20%都可以的,退不需要调整什么,就是延伸最好按照pfu的设置
3楼2010-05-06 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝粉笔

铁虫 (初入文坛)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-06 22:52:21
那种酶保真效果更好呢?我也在纠结这个问题,一个碱基错了就得重来了,很郁闷。或者有什么方法可以提高酶的保真性呢?是优化Mg还是dNTP或是温度?
4楼2010-05-06 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 号外号外 +5 GZUZM 2026-08-24 5/250 2026-08-24 18:34 by 40862026
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +20 koalala 2026-08-24 22/1100 2026-08-24 18:01 by Nano-Firefly
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 我面上完蛋了 +8 且听虎啸 2026-08-20 9/450 2026-08-24 13:52 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见