24小时热门版块排行榜    

查看: 1937  |  回复: 16

humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】【求助】有没有做过pfu和rTaq一起使用的 已有14人参与

最近在做PCR,目的基因大小为1kb。用rTaq扩增效果很好,但是发生突变,我最终的产物是用来表达,测定生物活性的所以要求没有突变。后来就买了promega的pfu但是不论怎么探索就是P不出来,500多元买的东西,眼见就没了,兄弟我急啊。所以打算退而求其次,将pfu和rTaq混合起来用,但是不知道以下内容:
1:二者的配比是多少?
2:两个混合到一起,用谁的buffer?
3:退火温度是迁就rTaq还是pfu?


谢谢大家~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

蓝粉笔

铁虫 (初入文坛)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-06 22:52:21
那种酶保真效果更好呢?我也在纠结这个问题,一个碱基错了就得重来了,很郁闷。或者有什么方法可以提高酶的保真性呢?是优化Mg还是dNTP或是温度?
4楼2010-05-06 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lingn

木虫 (正式写手)


humants(金币+1):谢谢参与
1:1混就好,用PFU的buffer,退火温度有区别吗?
2楼2010-05-06 16:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)


humants(金币+1):谢谢参与
呵呵,1/16或者20%都可以的,退不需要调整什么,就是延伸最好按照pfu的设置
3楼2010-05-06 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-06 22:52:28
我建议楼主买个宝生物的EX Taq,比普通rtaq保真性高很多,错配很少,又不像PFU条件那么苛刻,极容易扩增出来,价格也没那么贵。而且末端带“A”,可以直接连进载体,比PFU省劲多了
5楼2010-05-06 18:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)

谢谢大家的参与
6楼2010-05-06 18:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):试试下次 2010-05-06 22:53:16
pfu:taq 3:7
我们实验室就这么用的 效果还不错
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
7楼2010-05-06 19:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by jerryqpr at 2010-05-06 19:58:58:
pfu:taq 3:7
我们实验室就这么用的 效果还不错

请问你们用的是哪种buffer,是pfu的还是rTaq的?
8楼2010-05-06 21:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公

我们用的是pfu的buffer
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
9楼2010-05-09 09:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):正解 2010-06-14 13:16:02
buffer需要优化,按比例多个梯度
10楼2010-06-13 09:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 humants 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 号外号外 +5 GZUZM 2026-08-24 5/250 2026-08-24 18:34 by 40862026
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +5 scalable 2026-08-24 5/250 2026-08-24 17:03 by spiderzhuzhi
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 明天应该可查了!? +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见