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PCR出现非特异性扩增，求高手解答
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体系：2xmix 12.5ul,引物（Im26-f,Im3r）各0.5ul，ddw10.5，模版200ng，1ul。程序94 5min，94 30s，56 30s，72 60s，72 7min，30个循环。出现非特异性扩增，求高手解答 |
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2楼2012-08-25 11:47:03
chenguestc
木虫 (职业作家)
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3楼2012-08-25 15:01:50
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5楼2012-08-26 00:00:15
aofeng860308
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6楼2012-08-26 13:13:50
【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哈 2012-08-27 13:42:37
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| 首先，确定你的非特异性带是怎么来的，也就是简单地做一个无模板对照，一般做PCR最后做一个阴性对照和阳性对照，看你的操作是否有误或者试剂有无污染之类的，如果是你比较成熟的体系，可以不做对照，但是如果是刚开始一个新的程序，最好还是做个阴性对照，排除是水或者试剂的污染造成的非特性带，然后才是看是否由于退火温度引起的。一般情况下PCR的退火温度要根据你的引物Tm值来确定，一般是比引物Tm值低3度左右，当然有的高保真酶是要求比引物Tm值高；有非特异性条带的另一种可能是你设计的引物刚好在基因组其他地方也能扩增，也就是引物的特异性不是很好，你设计好引物后，可以先Blast一下。希望能帮助你。 |
7楼2012-08-26 19:20:51
Marado
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8楼2012-08-27 08:44:43
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9楼2012-08-27 10:13:37
piaoyunokok
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10楼2012-08-27 11:16:18
