| 查看: 3119 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR出现非特异性扩增，求高手解答
|
|||
体系：2xmix 12.5ul,引物（Im26-f,Im3r）各0.5ul，ddw10.5，模版200ng，1ul。程序94 5min，94 30s，56 30s，72 60s，72 7min，30个循环。出现非特异性扩增，求高手解答 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有83人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR失败求高手指点！！！！！！！！！
已经有3人回复
- 关于qPCR的几个问题，求解答
已经有3人回复
- PCR产生非特异性带
已经有11人回复
- PCR标准体系有关问题。。求高手解答
已经有5人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- PCR高手请进，小女子有事相求，我刚来金币不要嫌少啊，我只有这么多啊，全给你了
已经有20人回复
- 连接后转化子PCR出现非特异性的条带
已经有10人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 真菌ITS序列PCR扩增 求助
已经有9人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助】关于引物非特异性的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教
已经有29人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哈 2012-08-27 13:42:37
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哈 2012-08-27 13:42:37
| 首先，确定你的非特异性带是怎么来的，也就是简单地做一个无模板对照，一般做PCR最后做一个阴性对照和阳性对照，看你的操作是否有误或者试剂有无污染之类的，如果是你比较成熟的体系，可以不做对照，但是如果是刚开始一个新的程序，最好还是做个阴性对照，排除是水或者试剂的污染造成的非特性带，然后才是看是否由于退火温度引起的。一般情况下PCR的退火温度要根据你的引物Tm值来确定，一般是比引物Tm值低3度左右，当然有的高保真酶是要求比引物Tm值高；有非特异性条带的另一种可能是你设计的引物刚好在基因组其他地方也能扩增，也就是引物的特异性不是很好，你设计好引物后，可以先Blast一下。希望能帮助你。 |
7楼2012-08-26 19:20:51
感谢参与，应助指数 +1
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2012-08-25 11:47:03
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
3楼2012-08-25 15:01:50
4楼2012-08-25 16:48:41
